Читайте также:
|
|
Величина Rf | |
1. Толуол – ацетон (95:5) | 0,45 |
2. Гексан - ацетон (3:2) | 0,60 |
3. Бензол – этилацетат (13:7) | 0,75 |
Проявление пятен (табл. 2) карбофурана основано на гидролизе препарата спиртовым раствором щелочи и образовании окрашенных соединений с солями диазония: прочный синий Б, прочный голубой Б, прочный красный Б.
Таблица 2. Проявляющие реагенты и окраска пятен
№ пп. | Проявляющие реагенты | Окрашивание |
15% раствор гидроксида калия в спиртово-водном растворе и смесь 0,1% раствора пара-нитроанилина в 0,1 н растворе соляной кислоты и 4% раствора нитрита натрия (10:1) | Красно-вишневое | |
15% раствор гидроксида калия в спиртово-водном растворе и 0,01% раствор прочного синего Б в ацетоне | Желтое | |
Бромфеноловый реактив, нагревание 10 минут при температуре 50 оС и после охлаждения 5% раствор уксусной кислоты | Желтое на фиолетовом фоне | |
1% раствор хлорида меди (11) в этиловом спирте | Голубое |
Окраска пятен на пластинке устойчива в течение 1,5 месяцев. При проявлении раствором прочного синего Б метаболиты карбофурана (табл. 3) детектируются пятнами различного цвета [1].
Таблица 3. Окрашивание и флуоресценция пятен карбофурана и его метаболитов
Карбофуран и метаболиты карбофурана | Флуоресценция в УФ -свете | Окрашивание пятен с прочным синим Б | Величина Rf в системе гексан-ацетон (3:2) |
Карбофуран | Сиреневая | Желтое | 0,60 |
О-(2,3-дигидро-2,2-диметил-3-гидрокси-7-бензофу-ранил)-N-метилкарбамат | Желтая | Розовое | 0,38 |
2,3-дигидро-2,2-диметил-3,7-бензофурандиол | Фиолетовая | Кирпично-красное | 0,44 |
2,3-дигидро-2,2-диметил-3-кето-7-бензофуранил-N-метилкарбамат | Желтая | Сиреневое | 0,49 |
2,3-дигидро-2,2-диметил-3-оксо-7-бензофуранол | Желтая | Фиолетовое | 0,59 |
2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранол | Оранжевая | Оранжевое | 0,78 |
Сухие остатки аликвот хлороформного извлечения из печени при рН 2 и контрольного раствора карбофурана растворяли в этиловом спирте и снимали спектр поглощения на спектрофотометре НР 8453 «Хьюлетт-Паккард» в интервале длин волн 220-400 нм. Наблюдали максимум поглощения карбофурана при длине волны 276 нм (рис. 1).
Рис. 1. УФ-спектрограмма карбофурана.
Идентификацию карбофурана (табл. 2) проводили на газовом хроматографе «Кристаллюкс-4000» с использованием пламенно-ионизационного детектора на капиллярной кварцевой колонке длиной 30 м, диаметром 0,32 мм, с нанесенной жидкой фазой OV-101, толщина плёнки жидкой фазы 0,5 мкм. Температура колонки 180 °С, испарителя и детектора 250 °С. Давление газа-носителя (азота) на входе в колонку 1 атм. Скорость воздуха 250 мл/мин, водорода – 30 мл/мин. Время удерживания карбофурана при исследовании стандартного раствора и исследуемых извлечений из кислой среды – 8,11 минуты. В извлечениях регистрировали также пики метаболитов с временем удерживания: 1,35; 2,42; 4,22; 5,59 мин и т.д.
Рис. 2. Хроматограмма ГЖХ исследования карбофурана.
Хромато-масс-спектрометрическое исследование карбофурана проводили на хроматографе «Agilent 6890 Series GC System» с масс-селективным детектором Agilent 5973N на капиллярной кварцевой колонке НР-5MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с нанесенной диметилполисилоксановой фазой (толщина пленки фазы 0,25 мкм). Идентификацию компонентов исследуемых образцов проводили по масс-спектрам электронного удара, ионным масс-хроматограммам и библиотекам масс-спектров NIST02.L., WILEY7N.L., ТОХ3.L. На хроматограмме масс-спектрометрически (рис. 3, 4) идентифицировали пик карбофурана (основные ионы m/z = 164, 149, 131, 122, 123, время удерживания - 10,325 мин).
Количественное определение карбофурана проводили методом прямой калибровки на высокоэффективном жидкостном хроматографе Agilent Technologies серии 1100 с диодно-матричным детектором. Колонка Hypersil ODS. Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (40:60). Скорость потока элюента 1 мл/мл. Рабочая длина волны 278 нм. Объем вводимой пробы 20 мкл. Идентификацию проводили по сопоставлению времен удерживания и УФ спектрам контрольного и исследуемого образцов.
При проведении судебно-химического исследования карбофуран изолировали из желудка подкисленной водой с последующей экстракцией хлороформом при рН 2; из крови и желчи – прямой экстракцией хлористым метиленом. Подтверждена эффективность использованных методов для секционного материала, идентификацию карбофурана и его метаболитов проводили методами газо-жидкостной хроматографии, тонкослойной хроматографии, газовой хроматографии с масс-селективным детектором, высокоэффективной жидкостной хроматографии, спектрофотометрии в УФ-свете. Концентрация карбофурана в крови составила 78 мг/л, в желчи – 3,8 мг/л.
Дата добавления: 2015-01-30; просмотров: 29 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |