Студопедия  
Главная страница | Контакты | Случайная страница

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Фаг Р4.

Структура как у любого уважающего себя фага: головка с хвостом. Сателлитный фаг: образует потомство лишь в присутствии фага Р2. ДНК реплицируется в отстутствие фага Р2, но без Р2 нет упаковки в частицы, поскольку геном Р4 не кодирует структурные белки и фермент для созревания ДНК. Геном кодирует белок А.

               
 
Линейная д.ц. ДНК длиной около 12 т.п.н. с липкими концами длиной 19 п.н. такими же как у фага Р2. Внутри клетки ДНК циклизуется и сверхспирализуется, за счет клеточных лигазы и гиразы. Умеренный фаг. Мы рассмотрим репродуктивный цикл. Репликация по схеме Кернса.   Cтруктура ori. 6 несовершенных повторов длиной 10-12 п.н и сбоку А/Т богатый участок. Для более эффективного функционирования ori нужен участок, удаленный на 1000 п.н, называемый CRR (Cis Replicative Region). Его функция не известна.
   
 
   
 
   
 

 


 

 

       
   
CRR
 
 

 

 


Ori узнается вирусным белком А (~80 кДа). А белок, как и T-Ag, полифункционален:

1.связывается с ori и с CRR (С-концевым ДНК-связывающим доменом);

2.способен к димеризации;

3.АТФ-зависимая хеликаза (3'-5');

4.праймаза (в отличие от T-Ag).

Репликация осуществляется по схеме Кернса. В инициации участвует вирусный белок А, в элонгации ДНК полимераза Ш, SSB, белок А. Не участвуют клеточные Dna B, DnaG, Rep.

В результате репликации образуются кольцевые ДНК. В вирион упаковывается только линейная ДНК. Процессинг ДНК осуществляет терминаза фага Р2.

 

Фаг λ.

Особенность репликации фага в том, что она начинается по схеме Кернса, а заканчивается по схеме разматывающегося рулона. Геном представлен линейной д.ц. ДНК длиной 48502 п.н., с липкими концами длиной 12 нт. Внутри инфицированной клетки ДНК циркуляризуется и сверхспирализуется с помощью клеточных белков. Кольцевые молекулы образуются и при выщеплении профага.

 
 
А/Т rich


Структура ori.

                   
         
 
 
 
 

 

 


Ori расположен внутри гена O, кодирующего ori-связывающий белок. Состоит из четырех палиндромов (их еще называют итеронами), к которым справа примыкает А/Т богатый участок.

Инициация репликации. Ori узнается вирусным белком – О-белком (продукт гена О). О-белок тетрамеризуется на ori и образует комплекс с ДНК, называемый О-сомой (комплекс виден в электронный микроскоп). В О-соме ДНК немного подплавляется и в комплекс привлекается клеточная хеликаза DnaB в комплексе с вирусным белком Р (аналог клеточного DnaC), который угнетает ее активность, а также способен взаимодействовать с О-белком.

 

Таким образом белок О привлекает хеликазу к ori, но она неактивна. В активации хеликазы участвуют клеточные белки – шапероны: DnaJ, GrpE, DnaK (комплекс аналогичен Hsp70 эукариот), которые вызывают диссоциацию белка Р из комплекса.

DnaB начинает расплетать ДНК. На одноцепочечные участки ДНК садится праймаза и начинает синтезировать РНК-затравку. Если в комплексе нет GrpE, то реплицируется только одна цепь (односторонняя (вправо) репликация). Для инициации репликации требуется транскрипция. Считается, что инициации репликации способствуют конформационные изменения, происходящие при транскрипции. При слабой интенсивности транскрипции происходит одностронняя репликация.

In vitro для репликации транскрипция не нужна, но если добавить белок E.coli – HU, то без транскрипции репликация не начинается.

Элонгация репликации. Осуществляется высокопроцессивной ДНК полимеразой III E.coli. Фермент состоит из нескольких субъединиц и представляет собой гетеродимер. Состоит из трех групп белков.

1)соre: α2-каталитическая (синтез ДНК 3’-5), ε2-экзонуклеазная (3’-5’, proofreading activity)

2)β2-фактор процессивности полимеразы (аналог PCNA)

3)τ2, γ22,δ’2, χ, ψ – clamp loader (загружает фактор процессивности на ДНК с затратой АТФ). τ в нужный момент способствует раскрыванию кольца β-субъединицы. δ,γ,δ’ – «гаечный ключ» раскрывает β2-фактор. Фактор процессивности снимается, когда полимераза сталкивается с затравкой.

Удаление РНК-затравок.

Затравку удаляют РНКазаН и ДНК полимераза I (обладает 5’-3’ экзонуклеазной активностью и способна удалять последний рибонуклеотид затравки, связанный с дезоксирибонуклеотидом). ДНК-полимераза III застраивает брешь.

 

Переход механизма репликации от схемы Кернса в схему разматывающего рулона.

 

Возможны несколько путей перехода.

 




Дата добавления: 2014-12-18; просмотров: 28 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав




lektsii.net - Лекции.Нет - 2014-2024 год. (0.009 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав