Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Окраска гипофиза азаном по Гейденгайну.

Приготовление растворов. 1. Раствор азокармина. 0,2 г азокармина G прибавляют к 100 мл дистиллированной воды, недолго кипятят и после охлаждения до комнатной температуры отфильтровывают. При этом часть нерастворившихся очень мелких кристаллов красителя проходит через фильтр и растворяется при последующем нагревании в термостате. К 100 мл профильтрованного раствора прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты.

2. Смесь анилинового синего с оранжевым. Растворяют 0,5 г растворимого в воде анилинового синего и 2,0 г оранжевого золотого G в 100 мл дистиллированной воды, приливают 8 мл ледяной уксусной кислоты, кипятят и после охлаждения фильтруют. Перед употреблением этот основной раствор разбавляют 1—3-кратным количеством дистиллированной воды.

3. Анилиновый спирт. 1 мл анилинового масла разводят в 1 л 90% спирта.

4. Уксуснокислый спирт. 1 мл ледяной уксусной кислоты на 100 мл 96% спирта.

5. 5% раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты.

Методика окрашивания. Материал, фиксированный в жидкости Ценкера, Буэна или Карнуа, заливают в парафин. После этого: 1) депарафинированные срезы помещают из дистиллированной воды в азокармин. Окраску производят в термостате при температуре 56—60°С в течение 45—50 мин, затем 5—10 мин охлаждают при комнатной температуре; 2) ополаскивают дистиллированной водой; 3) дифференцируют в анилиновом спирте, пока не будут хорошо видны ядра; 4) быстро смывают анилин уксуснокислым спиртом; 5) протравливают в 5% водном растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты 1—3 ч; 6) быстро ополаскивают дистиллированной водой; 7) окрашивают анилиновым синим-оранжевым 1—3 ч; 8) быстро промывают в воде; 9) дифференцируют в 96% спирте; 10) проводят через абсолютный спирт, ксилол, заключают в бальзам.

Результат: ацидофильные клетки окрашиваются в красный цвет, базофильные — в синий, хромофобные — в бледно-фиолетовый, соединительная ткань — в синий цвет.

Азановый метод хорош также для окрашивания щитовидной железы. При этом жидкий коллоид окрашивается в синий цвет, густой — в красный.

Хромаффинная реакция клеток мозгового вещества надпочечников (по Хиллартпу и Гекфельту). Реакция проводится на нефиксированной ткани.

Методика проведения реакции: 1) обработать тонкие срезы ткани при комнатной температуре смесью, содержащей 10 объемов 5% раствора K₂Сr₂O₇ и 1 объем 5% раствора K₂Сr₂O₄ с pH 5,6 в течение 16 ч; 2) промывать их в течение 30—60 мин в дистиллированной воде (3 раза менять воду); 3) поместить срезы на чистые предметные стекла и заключить в глицерин-желатин; 4) вместо предыдущей операции срезы можно обезводить, просветлить и заключить в канадский бальзам.

Результат: адреноциты окрашиваются в темно-коричневый цвет, норадреноциты — в желтовато-коричневый.

Окраска надпочечников по Визелю. Материал фиксируется в смеси из 9 объемов 3,5% раствора бихромата калия и 1 объема формалина в течение 24 ч.

Методика окрашивания: 1) срезы помещают в 1% водный раствор толуидинового синего на 20 мин; 2) промывают в водопроводной воде 5 мин; окрашивают 1% водным раствором сафранина 20 мин; 4) дифференцируют в 96% спирте до вторичного появления синей окраски; 5) просветляют в ксилоле, заключают в бальзам.

Результат: хромаффинные клетки зеленые, ядра красные, цитоплазма всех остальных клеток синяя.

Выявление аскорбиновой кислоты по Барнетту и Бурну. Используют тонкие кусочки нефиксированной ткани. Приготовление подкисленного раствора нитрата серебра. К 100 мл 5% водного раствора нитрата серебра добавить 5 мл ледяной уксусной кислоты.

Методика проведения реакции: 1) обработать срезы подкисленным раствором нитрата серебра в течение 5—10 мин; 2) обработать их в темноте 5% раствором аммиака в течение 10—15 мин; 3) промыть среды в дистиллированной воде; 4) заключить в глицерин.

Результат: черные зерна серебра указывают на присутствие восстановленной аскорбиновой кислоты.

Комбинированный метод выявления адреналина, норадреналина, непредельных фосфолипидов и ДНК в срезах надпочечника (по В. В. Яглову). Нефиксированный кусочек надпочечника помещают на 24 ч в смесь следующего состава: 9 мл 5% раствора бихромата калия, 1 мл 5% раствора хромата калия и 1 мл неразведенного раствора нейтрального формалина. Затем кусочек надпочечника переносят на 24 ч в насыщенный раствор сульфаниловой кислоты, которая, с одной стороны, усиливает хромаффинную реакцию, а с другой — производит мягкий гидролиз ДНК. Фиксируют материал в 10% растворе формалина 6—8 ч, промывают в дистиллированной воде 15 мин и приготавливают на замораживающем микротоме или криостате срезы толщиной 10—15 мкм. Срезы переносят в реактив Шиффа на 1 ч, промывают в 3 порциях сернистой воды и помещают в дистиллированную воду на 5—10 мин. После промывки срезы наклеивают на предметные стекла, покрытые белком-глицерином, обезвоживают и заключают в канадский бальзам.

Результат: в цитоплазме хромаффинных клеток адреналин окрашивается в желто-коричневый цвет, норадреналин — в золотисто-желтый. Фосфолипиды коркового вещества приобретают окраску от нежно-розовой до вишнево-красной. ДНК ядер окрашивается в красный цвет, как при реакции Фельгена.