Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Иммунологмческий анализ. ИМА

Реакция АГ-АТ. Образование комплекса. С помощью ИмА решаются 2 задачи:

1. Выведывание антигена или АТ. Чем лучше метод, чем выше, точнее чувствительность, тем меньшая концентрация АГ и АТ требуется!

2. ИмА служит для изучения АГ смесей с целью расшифровки входящих в состав их компонентов. Или для проведения анализа спектра АТ, продуцируемых в ходе иммунного ответа. Немаловажный фактор – доступность метода, т.е. возможность выполнить его в лаборатории, с минимальной затратой времени и денег. Время = ответственность за скот. Надо выбирать в таких случаях экспрессметоды! Че больше методов знаем, тем больше выбор.

1. Иммунлогический анализ включает 2 принципа определения результатов:
образование комплекса АГ-АТ определяется визуально – РА, РП, РИФ

2. Методы, констатирующие факт образования комплекса с помощью приборов. Для чего АГ и АТ надо метить. ИФА, РИФ, радиоиммуный метод – радиационная метка.

Помимо серологических реакций используют методы ДНК-диагностики – пцр, также для определения иммунного статуса животных, определяют показательи клеточного звена иммунитет, такие как фагоцитораная активность, активность ТЛ и БЛ. Из гуморальных фатокров определяют количество лизоцима, комплемента, уровень Ig разных классов, бактерицидная активность сыворотки крови.

Методы, основанные на визуальном учете:

РА – АГ в корпускулярной форме, а АТ обявляются по их способности агглютинировать. Бактерии, латекс. АГ может быть собственным компонентом частицы, может быть искусственно сорбирован на чатсице. В первом случае имеет место – прямая агглютинация – определение групп крови – качественная реакция, определяется факт наличия или отсутствия определенны АГ эритроцитов. Непрямой или пассивной агглютинации. Самый распространенный адсорбент – эритроциты. Реакция проходит в 2 стадии – первая, специфическая – невидимая, образование комплекса АГ-АТ и вторая, неспецифическая – видимая, когда происходит агрегация комплекса АГ-АТ, образуется агглютинат и выпадение его в осадок. Это количественная реакция, чувствительность метода определяется тем максимальным разведением сыворотки, при котором еще наблюдается агглютинация эритроцитов.

РП. Реакция преципитации. Может проходить в различных средах.

· АГ и АТ находятся в растворимой форме и при взаимодействии их в определенной концентрации и соотношениях на границе 2 растворов образуется кольцо преципитации.

· РИД – реакция иммунной диффузии в геле.

1. Рдп – реакция двойной преципитации. АГ и АТ мигрируют навстречу друго другу, образуя полосы преципитации. Учитывают количество и взаиморасположение линий преципитации. В центральной лунке – АГ, в остальных АТ, где есть АТ – полоса.

2. Радиальная иммунодиффузия по Манчини. Количественный метод, с помощью которого определяются Ig в сыворотке крови. Гель, при определенной температуре вносят сыворотки, образуются кольца преципитации, разные, т.к. разные подклассы. Проблема в том, что получение этих сывороток, очень долгий процесс, этим никто не занимается.

3. Иммуноэлектрофорез. Принцип в том, что соединена техника электрофореза и иммунодиффузии в геле. при многокомпонентной сыворотке. В агаре делают лунки, стандартный АГ. Первый этап – форез, разделение на белковые фракции. Их надо растянуть. В зависимости от массы, они займыт разные места. Легкие будут на краю. Вносим материал. Идет диффузия, АГ и АТ диффундируют навстречу друг другу, образуются линии симметричные, значит есть реакция.

· РСК – см раньше в вирусах.

Требует приборов.

· Имунофлюоресцентный метод. Использвет тканевые и микробные АГ, соединенные с флуорохромами. Их свечение возбуждается uv и светится зеленым. Прямой и непрямой методы

o Прямой. АТ конъюгированные с флюорохромом вступают в непосрдественных контакт с АГб фиксированным на стекле, АГ-АТ.

o Непрямой. Сэндвич. Фиксированные АГ обрабатываются немечеными АТ. После отмывания связавшиеся с АГ АТ выявляются с помощью антииммуноглобулиновых АТ, меченных флюоросцином.

· Иммуноферментный анализ, ИФА. Основан на взаимодействии АГ и АТ, конъюгированных с ферментом, Пероксидазой хрена, вводя сусбтрат для фермента иопределяют визуально при помощи окрашивания /зеленый/ ил ипри использовании спектрофотометра, второе точнее.

· Радиоиммунный метод. Метка- изотоп радиоактивного I¹²⁵ – H³ тимидин.

Читаем фагоцитоз!