Студопедия  
Главная страница | Контакты | Случайная страница

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Лабораторна діагностика.

Читайте также:
  1. Лабораторна робота № 1
  2. ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 2 Побудова лінійної економетричної моделі та дослідження її на адекватність
  3. Лабораторна робота № 3
  4. Лабораторна робота № 8
  5. Лабораторна робота №1
  6. Лабораторна робота №2
  7. Лабораторная работа
  8. ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
  9. Лабораторная работа

При загальноклінічних лабораторних дослідженнях у гемограмі відзначається поступово, але прогресивно наростаюча анемія, що характеризується одночасним і паралельним зниженням рівня еритроцитів і гемоглобіну аж до дуже низьких показників. Так, рівень гемоглобіну може знижуватися до 40 г/л, а еритроцитів - нижче 2,0 Т/л. Одночасно з анемією виявляється також прогресуюча тромбоцитопенія до 20-30 Г/л і лейкопенія, аж до 0,6 Г/л. У гемограмі визначається виражений агранулоцитоз на фоні різкого переважання мононуклеарів (лімфоцитів і моноцитів) до 70-90 %, також реєструється анеозинофілія і різке прискорення ШОЕ до 40-50 мм/год і вище. Це обумовлено супресорним впливом лейшманій і продуктів їх життєдіяльності на гемопоез, прямим пошкодженням макрофагальної системи при внутрішньоклітинній інвазії лейшманій в гістіоретикулоцити. У разі гнійно-септичних ускладнень, а також гнійно-некротичних процесів у гемограмі хворих має місце нормалізація лейкоформули, може з’являтися істинний нейтрофільоз з лейкоцитозом. У протеїнограмі відзначається виражена гіпер-g-глобулінемія (50 % і вище від рівня загального білка), обумовлена активацією СФМ, а також відносна гіпоальбумінемія.

Діагностика спрямована на виявлення, виділення й ідентифікацію збудників ВЛ.У даний час в діагностиці ВЛ залишається актуальною і зберігає домінуючі позиції дослідження зразків кісткового мозку, а також біопсійного матеріалу з лейшманоїдів, лімфовузлів, печінки і селезінки, використовуючи світлову мікроскопію – паразитоскопію із забарвленням препаратів гематоксилін-еозином. У деяких випадках лейшманій також можна знайти при дослідженні товстої краплі або мазка крові, що використовується для діагностики малярії. В забарвлених препаратах можна знайти амастиготи лейшманій, розташовані як позаклітинно, так і усередині клітин макрофагального ряду (мал. 1). Необхідно відзначити, що не у всіх пацієнтів з ВЛ можна виявити наявність паразита при мікроскопії зразків кісткового мозку. Навіть у період розпалу ВЛ лейшманії можуть виявлятися тільки в декількох клітинах забарвленого препарату пунктату кісткового мозку. Тому украй важлива детальна і пильна мікроскопія всього препарату. Украй важливо використовувати для діагностики мікроскопи з якісною оптикою і системою освітлення, широкопольними окулярами, можливістю отримання відеозображення і відеодокументації!

Морфологічно різні підвиди збудників ВЛ не відрізняються. Ідентифікацію лейшманій за необхідності проводять, застосовуючи методи біохімічного дослідження, антигенної презентації за допомогою імунологічних методів, а також генотипування збудника із застосуванням молекулярних методів.

Найбільш характерне розташування амастигот лейшманій внутрішньоклітинно в макрофагах (мал. 1). Число лейшманій у макрофагу може досягати 20-30 і більше. Розміри амастигот варіюють від 2 до 5,5 мкм (для порівняння діаметр еритроцита дорівнює 7-9 мкм). Нерідко також відзначається розрив макрофага і вихід з нього амастигот. Після виходу амастигот з клітин СФМ можна знайти їх позаклітинно. Амастиготи мають характерну витягнуту форму з ексцентрично розташованим ядром і кінетопластом, що чітко візуалізується (мал. 1).

Використовуючи можливість позаклітинного росту лейшманій, для діагностики ВЛ застосовують також культуральний метод дослідження – посів крові, кісткового мозку, пунктату лімфовузлів, печінки або селезінки на тверді або рідкі живильні середовища з подальшою ідентифікацією лейшманій за морфологією (мікроскопія), мембранними антигенами (реакція аглютинації (РА), імуноферметний аналіз (ІФА), імунофлюоресцентний аналіз (ІФЛ) або генотипом (полімеразна ланцюгова реакція, ДНК-гібридизація і т.ін.).

На безклітинних середовищах лейшманії культивують при температурі 22-27 ºС. На твердих живильних середовищах лейшманії ростуть у вигляді промастигот, які створюють прозорі краплеподібні колонії вже нерідко через 3-4 дні, даючи інтенсивний ріст через 2-4 тиж. В рідких середовищах вони ростуть у вигляді окремих, рухомих промастигот. Найоптимальнішим і найбільш поширеним з безклітинних середовищ для культивування лейшманій на сьогодні є кров’яний агар NNN. Можливе виділення лейшманій з досліджуваного матеріалу і на культурі чутливих клітин (McCoy і ін.), що перевиваються, при температурі 37 ºС. У клітинних культурах лейшманії ростуть у вигляді амастигот. Використовується також паразитологічний метод дослідження. Матеріалом від хворих (тим же, як і у разі культурального дослідження) заражають чутливих до лейшманій тварин (хом’яків Cricetulus griseus або Mesocricetus auratus). Якщо тварини не гинуть, через 15-30 днів їх убивають і з тканин печінки, селезінки і лімфатичних вузлів готують мікропрепарати (мазки або відбитки), які потім фарбують за Романовським-Гімзою і досліджують на наявність лейшманій, використовуючи світлову мікроскопію. Також тканини цих тварин досліджують на наявність лейшманій, використовуючи ІФА, ІФЛ, ПЛР і рідше культуральні методи.

Для виявлення антигенів лейшманій у біологічних середовищах, зокрема в сечі пацієнта, сьогодні використовується метод прямої аглютинації (латексний тест), що має важливе діагностичне значення для імунодефіцитних хворих, в яких істотно знижений синтез антитіл, а отже результати імунологічних тестів з детекції специфічних антитіл у крові можуть бути негативними. Крім цього латексний тест використовується для експрес-діагностики ВЛ. Разом з вказаними вище застосовують також імунофлюоресцентний метод виявлення збудника за специфічними антигенами при мікроскопії препаратів біопсійного матеріалу, узятого від пацієнта або в препаратах тканин заражених тварин, при паразитологічному методі дослідження.

Для діагностики ВЛ сьогодні застосовуються й молекулярні методи, які все ширше використовуються в клінічній практиці. До цих методів діагностики належать ПЛР у різних технічних модифікаціях, ДНК-гібридизація, метод ДНК-зондів, а також комбінації вказаних методів. Вони дозволяють у біологічних середовищах і тканинах пацієнта й тварин одночасно з детекцією специфічних ділянок ДНК збудника проводити його генотипування. Необхідно вказати, що реальне практичне значення в клінічній практиці має тільки ПЛР, проте і її застосування ще обмежене високою вартістю обладнання і тест-систем.

Серологічні (імунологічні) реакції, що використовувались раніше, – реакція непрямої імунофлюоресценції і непрямої аглютинації (РНІФ і РНГА) сьогодні практично втратили діагностичне значення. Для діагностики ВЛ зараз використовують сучасні імунологічні методи. Для детекції у крові специфічних антитіл застосовують ІФА, імунохроматографічний аналіз ( ІХА) і метод прямої аглютинації у вигляді експрес-тестів («швидких, мобільних» тестів або «діагностичних смужок»). Необхідно враховувати антигенну схожість Leishmania donovani з Trypanosoma cruzi, а отже і можливість перехресних імунологічних реакцій в осіб, які перебували в Центральній або Південній Америці.

Слід вказати, що більшість з наведених вище методів і тестів сьогодні ще не доступні для лабораторій більшості клінік навіть у розвинених країнах. Як і раніше, провідним методом діагностики ВЛ залишається паразитоскопія біопсійного матеріалу пацієнта (кісткового мозку, лімфовузлів, печінки, селезінки).




Дата добавления: 2015-04-11; просмотров: 23 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав

1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | <== 12 ==> | 13 | 14 | 15 | 16 |


lektsii.net - Лекции.Нет - 2014-2024 год. (0.007 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав