Читайте также:
|
|
При определении этого показателя необходимо обратить внимание на его значение в жизни человека, выяснить основные причины, вызывающие его разрушение, связать их с химической природой аскорбиновой кислоты, разобрать принцип метода ее определения.
Витамин С, называемый также аскорбиновой кислотой, является производным углеводов и может существовать в двух формах: аскорбиновой и дегидроаскорбиновой кислоты. Кроме того, в плодах и овощах содержится связанная форма аскорбиновой кислоты.
Биологически активной является восстановленная аскорбиновая кислота; она быстро окисляется и переходит в дегидроаскорбиновую кислоту; процесс является обратимым.
Аскорбиновая кислота легко разрушается в растворах, особенно в присутствии воздуха, света, следов меди или железа, ферментов, повышенной температуры.
Устойчивость аскорбиновой кислоты в растворах зависит от реакции среды. В кислой среде она сравнительно устойчива, а в щелочной легко разрушается.
Метод ее количественного определения основан на восстанавливающих свойствах аскорбиновой кислоты и восстановлении ею 2,6-дихлорфенолиндофенола до бесцветного соединения. При титровании окрашенных растворов в качестве окислителя применяют йод (раствор йодноватокислого калия КIОз).
2,6 - дихлорфенолиндофенол (краска Тильманса) при реакции с восстановленной аскорбиновой кислотой восстанавливается и переходит в бесцветное соединение.
Схема определения аскорбиновой кислоты:
1 Извлечение аскорбиновой кислоты из навески.
1.1 Измельчение исследуемого объекта (ножом из нержавеющей стали или на пластмассовой терке
1.2 Отбор и взвешивание навески.
1.3 Экстрагирование аскорбиновой кислоты из навески слабокислым водным раствором при растирании.
2. Количественное определение аскорбиновой кислоты.
2.1. Разбавление вытяжки до определенного объема (100 мл).
2.2. Титрование краской Тильманса (2,6-дихлорфе нолиндофенолом
2.3. Расчет.
С6Н8О6 + C12H6N02Cl2Na →С6Н6О6+ C12H8N02Cl2Na (2.9.1)
Аскорбиновая краска окисленная дегидро- восстановленная форма
кислота форма (синий цвет) аскорби- бесцветная)
новая кислота
Исследуемый раствор аскорбиновой кислоты титруют 2,6-дихлорфенолиндофенолом при рН менее 4, то есть в такой среде, где индофенол переходит в розовый цвет. Пока в растворе присутствует восстановленная аскорбиновая кислота, краска, вступая с ней в реакцию, обеспечивается, как только вся кислота оттитрована, первая же капля краски окрасит титруемый раствор в розовый цвет.
Техника определения. Анализируемую пробу плодов или овощей предварительно грубо измельчают ножом или скальпелем из нержавеющей стали на плексиглазовой пластинке. Весь процесс выполняют возможно быстрее. Средняя проба составляется не менее чем на 10 экземпляров, поэтому пробу для анализа берут так, чтобы входили в соответствующей пропорции все ткани данного экземпляра.
Обычно объект разрезают на 2 половины по главной оси и отрезают сегмент толщиной 0,5-1 см. Полученные сегменты ткани быстро измельчают ножом на мелкие кусочки и перемешивают (можно использовать пластмассовую терку). Крупные сочные плоды (томаты и т. п.) режут по вертикальной оси на 4 части, берут одну часть от каждого плода, измельчают ножом или грубо растирают в большой фарфоровой ступке и перемешивают. Мелкие плоды и ягоды (сливы, смородину и т. п.) измельчают в ступке целиком.
При измельчении продукта следует помнить, что следы железа и меди катализируют разрушение аскорбиновой кислоты, поэтому нельзя пользоваться железными ножами, терками и т. д.
При анализе навеску исследуемого материала в 20 гзаливают в ступке 20 мл. 1 % -ной соляной кислотой и растирают да образования гомогенной массы (процесс растирания не должен пре6ышать 10 мин), для лучшего измельчения в ступку добавляют 4,5 гизмельченного стекла или кварцевого песка. Растертую массу сливают из ступки с помощью стеклянной палочки и воронки в мерную колбу на 100 мл.Ступку ополаскивают 1 %-ным раствором щавелевой кислоты, которую выливают в ту же мерную колбу. Колбу доводят да метки 1 % -ным раствором щавелевой кислоты, хороша перемешивают и фильтруют через два слоя марли или ваты в сухую колбу.
Соляная кислота извлекает из растительной ткани как свободную, так и связанную аскорбиновую кислоту. Щавелевая же кислота улучшает стойкость аскорбиновой кислоты в экстрактах. 5 млфильтрата помещают в фарфоровую чашку или коническую колбу емкостью 50-100 мли титруют из микробюретки раствором 2,6 дихлорфенолиндофенола до устойчивого розового окрашивания. Содержание витамина С в мг на 100 гпродукта вычисляют по формуле:
(2.9.2)
где V - количество 2,6 дихлорфенолиндофенола, пошедшее на титрование вытяжки, мл;
Т - количество аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл 2,6 дихлорфенолиндофенола, мг;
V1 - объем вытяжки, приготовленнай из навески вещества, мл;
100 - пересчет мг на 100 г продукта;
q - навеска продукта, г;
V2 - объем вытяжки, взятый для титрования, мл.
При самостоятельном приготовлении 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола следует точно отвесить 60 мг cyхой краски, перенести ее в мерную колбу на 200 мл, прибавить 150 млтеплой дистиллированной воды и 4-5 капель 0,01 н щелочи; после сильного 10-минутного взбалтывания колбу доливают, водой до метки и, перемешав, фильтруют через плотный фильтр в сухую колбу. Раствор краски хранят в темной бутылке в холодильнике не более 3-х недель.
Для определения поправки к титру краски быстро отвешивают 0,02 гчистой аскорбиновой кислоты, переносят в мерную колбу на 100 мл,добавляют 20 мл1 % -ной соляной кислоты и доводят колбу до метки 1 %-ным раствором щавелевой кислоты.
Пипеткой отбирают 5 млвытяжки в маленькую коническую колбу, добавляют 5 мл1 % -ной щавелевой кислоты и титруют из микробюретки раствором краски до получения яркого розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Поправку к титру краски рассчитывают по формуле:
(2.9.3)
где а - количество мл краски, пошедшее на титрование 1 мгаскорбиновой кислоты.
Поправку к титру краски следует определять каждые 2-3 дня.
При определении содержания витамина С в окрашенных растительных экстрактах используют йодометрический метод. Вытяжки из растительного материала приготовляют обычным способом и титруют раствором калий йодaтa в присутствии крахмала как индикатора.
При установлении условий анализа надо помнить, что краска играет роль индикатора: при рН 6-7 она имеет синюю окраску, в интервале рН 5-4 - фиолетовую, а при рН менее 4 переходит в розовый цвет.
Для сравнения окраски рядом ставят колбочку с тем же экстрактом в качестве свидетеля (контрольная проба). При оттитровании аскорбиновой кислоты в розовом растворе от одной лишней капли йодата появляется фиолетовое окрашивание, особенно ярко выступающее по сравнению с контрольной пробой.
Техника определения. Вытяжку для определения аскорбиновой кислоты готовят так же, как и при дофенольном способе. Затем отбирают в 3 конические колбочки 10 мл вытяжки добавляют по 0,5 мл1 % -ного раствора йодистoгo калия и 2 мл0,5 % -ного раствора крахмала и оттитровывают из микробюретки 0,001 н раствором йодноватокислого калия до устойчивого синего окрашивания.
Параллельно ведут контрольное титрование смеси применявшихся реактивов (вместо фильтрата берут то же количество дистиллирован-ной воды). Вычисление результатов проводят по разности количества 0,001 н раствора йодата калия, пошедшего на титрование опытного образца и контроля. При этом расчете учитывают, что 1 мл точно 0,001 н раствора йодноватокислого калия соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты (Т).
Раствор йодноватокислого калия удобно приготовлять из фиксанала, получая сначала 0,1 н раствор, из которого по мере надобности приготовляют 0,001 н раствор.
Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 28 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |
<== предыдущая лекция | | | следующая лекция ==> |
Определение титруемой кислотности | | | Определение пектиновых веществ |