Подходы к иммунодиагностике злокачественных новообразований основаны на наличии на поверхности опухолевых клеток специфических антигенов, отличающих их от нормальных клеток. Присутствие этих маркеров преимущественно или исключительно на опухолевых клетках имеет диагностическое значение, поскольку позволяет их идентифицировать.
В сыворотке онкологических больных также содержатся факторы, специфичные для опухолей. Это – растворимые опухолевые антигены, антитела и лимфоциты, специфичные к антигенам, ассоциированным с опухолью.
Целью иммунодиагностики является разработка надежных тестов in vitro, позволяющих обнаружить опухоль до развития клинических симптомов, определить ее тип и локализацию. Такие тесты необходимы при ранней и дифференциальной клинической диагностике. Эти же тесты могли бы помочь в обнаружении метастазов опухолей на более поздних клинических стадиях. Именно с помощью стандартных унифицированных иммунологических методов можно было бы проводить массовый скрининг и выявлять группы повышенного риска.
В настоящее время в клинической практике пока еще мало доступных и широко распространенных диагностических иммунологических тестов, которые отвечали бы всем этим требованиям и были бы относительно недорогими. Однако многие фармацевтические фирмы и научные институты ведут интенсивные работы по их созданию. На этом пути уже достигнут ряд впечатляющих успехов.
Прежде всего необходимо упомянуть использование в иммунодиагностике высокоспецифичных меченых (изотопами, ферментами для иммуноферментного анализа или люминесцентными красителями) моноклональных антител.
Моноклональные антитела к дифференцировочным антигенам лимфоцитов и гранулоцитов сыграли существенную роль в создании новой классификации и в разработке методов точной диагностики таких гетерогенных опухолей, как лейкозы. До создания этой классификации и основанных на ней методов дифференциальная диагностика лейкозов, особенно лимфолейкозов, была довольно проблематичной. С помощью моноклональных антител удалось доказать, что по своим мембранным антигенам лейкозные клетки соответствуют определенной стадии дифференцировки нормального гемопоэтического клеточного ряда.
Было показано, что определенным стадиям дифференцировки Т-, В-лимфоцитов, а также клеток миелоидного и моноцитарного ряда соответствуют определенные стадиоспецифические антигены. Антигены поверхности лейкозных клеток отражают, на какой стадии дифференцировки и какого типа клетка дала начало клеткам опухолевого клона. Все эти клетки имеют общие стадиоспецифические антигены, совпадающие с антигенами родоначальной опухолевой клетки.
Для клеток острого В-лимфолейкоза характерно наличие стадиоспецифического антигена CD 10. Для острого Т-клеточного лимфолейкоза характерен маркер CD5. Для диагностики В-клеточных лимфом используются моноклональные антитела CD20.
В настоящее время имеются стандартные международные наборы моноклональных антител к различным типам и вариантам лейкозных клеток и клеток различных видов лимфом. С их помощью возможно не только обнаружение и дифференциальная диагностика лейкозов и лимфопролиферативных заболеваний, дающая возможность выбора наиболее рационального способа лечения, но и определение распространенности процесса, а также контроль за эффективностью лечения.
Еще одним примером применения моноклональных антител для диагностики В-клеточных хронических лимфолейкозов является использование антител, направленных против вариабельных доменов иммуноглобулинов, экспрессированных на поверхности лейкозных клеток (антиидиотипические антитела). Так как клетки В-клеточного хронического лимфолейкоза всегда развиваются из одной клетки-предшественницы, то все они принадлежат к одному и тому же клону и имеют, следовательно, один и тот же идиотип поверхностных иммуноглобулинов. Антиидиотипические антитела с весьма высокой степенью разрешения позволяют идентифицировать лейкозные клетки, в том числе и те, которые обычными методами не выявляются.
Моноклональные антитела к опухолевым антигенам используют при радиоизотопном сканировании, которое позволяет получить картину распределения в организме меченных изотопами моноклональных антител к опухолевым антигенам. С помощью этого метода можно обнаружить самые незначительные количества опухолевых клеток. При лейкозах это дает возможность обнаружить оставшиеся после химиотерапии или облучения опухолевые клетки в костном мозге и на периферии.
Данный метод дал хорошие результаты при диагностике и выявлении метастазов и при целом ряде других злокачественных опухолей (карциномы толстого кишечника, злокачественные меланомы, рак молочной железы, нейробластомы).
Уже с середины 60-х годов при обследовании онкологических больных стали применять методы определения в сыворотке крови раково-эмбриональных антигенов, в первую очередь альфа-фетопротеина и карциноэмбрионального антигена. Первоначально это делалось с помощью реакции преципитации в геле (метод двойной диффузии по Оухтерлони), в последние годы большое распространение получили иммуноферментный и радиоиммунный методы с использованием стандартных наборов моноклональных антител против многих видов раковоэмбриональных антигенов, ассоциированных с определенными вариантами злокачествен-ных опухолей человека (рак печени, желудка, молочной железы, толстой кишки, карцинома поджелудочной железы, нейробластомы, тератомы, лейкозы и др.).
Меченые моноклональные антитела в последнее время стали пременять для обнаружения других специфических белков– продуктов онкогенов и других мутантных генов, участвующих в процессах злокачественной трансформации.
Весьма перспективным является также выявление с помощью моноклональных антител мутаций целого ряда генов, которые обусловливают наследственную предрасположенность ко многим видам рака.
В настоящее время имеется достаточно обширный и все пополняющийся перечень опухолей, для которых прямо прослежено наследование мутантных генов, ведущих к возникновению злокачественных опухолей. Ряд ведущих фармацевтических фирм уже создали наборы специфических моноклональных антител для иммунодиагностики этих мутаций.
Обнаружениемутантных Мус-белков характерно для лимфомы Беркита, рака груди, желудка и легких. Наличие белков, кодируемых онкогеном Bcl-2, характерно для В-клеточных лимфом. Продукты онкогена МDМ2 вовлечены в индукцию разных типов сарком у человека. Мутантный вариант белка р53, являющийся продуктом одного из основных генов супрессии опухолей, обусловливает образование широкого спектра злокачественных опухолей человека. Обнаружение дефектного гена АРС свидетельствует о большой вероятности возникновения наследственной формы рака прямой кишки; гены BRCA1 и BRCA2 связаны с наследственной предрасположенностью к раку молочной железы и т.д.
С помощью антиидиотипических моноклональных антител можно также идентифицировать опухолеспецифические цитотоксические Т-лимфоциты – как инфильтрирующие опухоль, так и находящиеся в циркуляции. Это позволяет не только оценить уровень специфического клеточного иммунного ответа у конкретного больного, но и с помощью иммуносорбции выделить опухолеспецифические CD8+ЦТЛ с целью дальнейшего их использования для иммунотерапии.
Дата добавления: 2015-01-29; просмотров: 51 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |