Исследования сывороток больных животных на наличие в них антител, а также определение титров антител в специфических Сыворотках при их промышленном изготовлении осуществляются с ромощью антигенов-диагностикумов. По происхождению такие антигены подразделяются на бактериальные, риккетсиальные, вирусные.
При изготовлении бактериальных антигенов используют или жижвые культуры или гомогенные стандартизированные взвеси убитых микробов. Антигены из живых культур применяются редко, так рак это связано с определенными технологическими трудностями, также возможностью заражения лабораторного персонала. Диагностикумы из убитых культур являются предпочтительными.
Приготовление диагностикумов связано прежде всего с тщательной подготовкой и селекцией штаммов микроорганизмов, из которых они готовятся. Производственные штаммы должны находиться в S-форме. Это обеспечивает им хорошую агглютинабильность, специфичность и образование устойчивой гомогенной взвеси. Чаще всего для получения диагностикумовопределенные штаммы микроорганизмов выращивают на агаровых средах. Культуры микробов смывают с поверхности агара, а затем их инактивируют 0,5%-м раствором формалина (бруцеллезный, туляремийный антиген), 1%-ми растворами борной кислоты (листериозный, сальмонеллезные, коли-антигены), нагреванием (бруцеллезный антиген) и другими методами.
Исходя из наших знаний об объективно существующем разнообразии антигенной структуры возбудителей инфекционных заболеваний, в производстве биологических препаратов получают различные диагностикумы. Например, из цельных микробных клеток готовят диагностикумы из бактерий, имеющих известную антигенную обособленность. В других случаях диагностикумы содержат антигены с преобладанием отдельных структурных элементов. Например, из бактерий кишечной группы методом селекции штаммов и обработки их соответствующими агентами получены О-, Н- и Vi-диагностикумы. Антигены бывают корпускулярными и растворимыми.
Корпускулярные антигены представляют собой взвесь убитых, реже живых микробов в физиологическом растворе с определенной концентрацией консерванта. Во всех случаях антигены подвергают высокой степени очистки. Такие антигены используются для постановки РА, РСК, РДСК.
Примером получения корпускулярного антигена является изготовление листериозного антигена УНИИЭВ для РСК из производcтвенных штаммов листерий двух серогрупп (по 2 штамма на серо- группу). Штаммы листерий выращивают на мартеновском агаре при температуре 37°С раздельно в течение 24—48 часов до получения обильного роста. Культуры выросших микробов смывают стерильным физраствором, смешивают и центрифугируют в течение 20 минут при 2000 об/мин. Осадок листерий подвергают экстрагированию вначале спиртом, а затем смесью спирта и серного эфира. После этого опять производят осаждение биомассы листерий центрифугированием при 2000 об/мин в течение 20 минут. Такую обработку антигена повторяют несколько раз. В конечном итоге листерии консервируют 1%-м раствором борной кислоты, доведя концентрацию микробной взвеси до 50 млрд/мл. Готовый антиген разливают в ампулы и подвергают контролю.
Подобные антигены, с рядом особенностей в технологии их изготовления, применяют в РА для диагностики бруцеллеза, кампилобактериоза, микоплазмоза, сальмонеллезов и других инфекций.
Чтобы повысить эффективность диагностики в системе организации противоэпизоотических мероприятий, необходимо расширить ассортимент высокоэффективных диагностикумов, пригодных к использованию в лабораторных и полевых условиях. Для этого готовят корпускулярные антигены, окрашенные какими-либо красителями. Например, для постановки пластинчатой реакции агглютинации на бруцеллез в настоящее время широко применяется антиген, представляющий взвесь в буферном растворе микробных клеток Вг. abortus 19, инактивированных нагреванием и фенолом и окрашенных бенгальской розовой в малиново-розовый (розбенгал-проба —РБП).
Растворимые антиген ы чаще всего готовят в виде экстрактов из агаровых культур соответствующих микробов. Они используются для постановки серологического диагноза с применением РСК при сапе, бруцеллезе, инфекционном эпидидимите баранов и других заболеваниях, а также при постановке диагноза с применением реакций иммунодиффузии (РИД) на бруцеллез, лейкоз и многие другие инфекции.
При некоторых инфекционных заболеваниях (бруцеллез, пуллороз и другие) рекомендуются и производятся промышленным способом эритроцитарные диагностикумы.
Такие антигены представляют собой 5—10%-ю взвесь эритроцитов барана, сенсибилизированных полисахаридно-полипептидной фракцией соответствующих возбудителей болезни. Они предназначены для прижизненной диагностики указанных и некоторых вирусных инфекций с применением реакции непрямой гемагглютинfции (РИГА).
Бактериофаги
Бактериофаги, выделенные из патогенных микроорганизмов, могут быть использованы как специфические лечебно-профилактические биопрепараты. Используя визуальный феномен лизиса культур микроорганизмов специфическим бактериофагом, в необходимых случаях его используют как диагностический тест. Например, в бактериологических лабораториях феномен бактериофагии используется как высокоспецифическая реакция при диагностике сибирской язвы.
Для этой цели биопредприятиями выпускается два сибиреязвенных бактериофага: К.ВИЭВ и Гамма MBA. Для их изготовления используют авирулентные штаммы возбудителя сибирской язвы. Такие культуры выращивают в МПБ или дрожжевом бульоне. Непременным условием является то, что при засеве нужно использовать молодые, 5—6-часовые, расплодки производственных штаммов возбудителя. Кроме того, сразу после посева штаммов В. antrhacis в бутыли вносится бактериофаг. Содержимое бутылей перемешивается, и они ставятся в термостат на 10—18 часов. По истечении указанного срока среду фильтруют через стерилизующие пластины или патроны. В фильтрате остается только бактериофаг. После изготовления бактериофага его разливают в ампулы и подвергают контролю на стерильность, активность и специфичность.
Сибиреязвенный бактериофаг используется как диагностикум при дифференциации возбудителя сибирской язвы от антракоидов.
Дата добавления: 2015-01-29; просмотров: 75 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |