Студопедия  
Главная страница | Контакты | Случайная страница

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Методика постановки.

Читайте также:
  1. Анатомо-физиологические особенности и методика исследования почек и мочевыделительной системы у детей
  2. Анатомо-физиологические особенности системы дыхания у детей. Методика исследования
  3. Билет № 13. Методика и алгоритм разработки туристского маршрута
  4. Бланковые, опросные, рисуночные и проективные психодиагностические методики. Сущность и частота встречаемости. Понятие об объективно-манипуляционных методиках
  5. Виды занятий и методика обучения
  6. Виды средних величин. Методика расчета и области применения средних величин
  7. Возрастной диапазон применения. Методика используется для работы с деть­ми от 7 до 11—12 лет.
  8. Вопрос 2. Методика расчета избыточного давления при сгорании газо-, паро- и пылевоздушных смесей в открытом пространстве
  9. Вопрос 40 Методика подготовки публичного выступления
  10. Вопрос № 41. Методика определения групп крови человека по системе АВО. Правила переливания крови.

 

Из исследуемого материала выделяют НК, которую помещают в чистую пробирку и добавляют амплифицирующую смесь, которая состоит из:

- Буфера

- ДНК-полимеразы

- Раствора 2-х видов праимеров

- 4-х видов нуклеотидов

- Магний-хлорного катализатора

- Крезолового красного для визуальной оценки

- Доливают деионизированной воды.

- Сверху капают минеральное масло.

 

Пробирки помещают в програмируемый термостат-амплификатор и проводят амплификацию в автоматическом режиме по заданной программе для соответствующего вида возбудителя (2-3 часа). Одновременно ставят положительный и отрицательный контроль.

 

Регистрация результатов – детекция амплификонов. Проводят методом электрофореза в 1-2% агаровом геле в присутствии бромистого этидия, который соединяется с фрагментами ДНК и высвечивается в виде полосок при УФО (трансилюминатор).

 

Этапы ПЦР-анализа: цель, методика, компоненты каждого этапа(см. выше)

Амплификация: принцип, компоненты, оборудование

Доказательства этиологической роли выделенного вируса как этап лабораторной диагностики вирусных болезней: исследуемый материал, методы, учет результатов

Патологическим материалом следует считать материал, полученный от больных или павших животных, в котором предположительно находится воз-будитель (вирус), который вызвал заболевание, или антитела, как результат иммунного ответа.

Патологический материал отбирают с учётом следующих правил:

 от больных животных в острый период болезни на фоне выражен-ных клинических симптомов, от павших и вынужденно убитых - не позднее од-ного - двух часов с момента гибели или убоя («правило времени»);

 из тех органов, где развивался патологический процесс, с учётом тропизма вируса («правило место»);

 с соблюдением правил асептики и антисептики (используют одно-разовый или стерильный инструментарий, контейнеры с этикетками, на кото-рых указывают вид материала и вид или инвентарный номер животного, растворы антибиотиков широкого спектра действия и противогрибковых препара-тов);

 доставляют в лабораторию с нарочным и сопроводительным пись-мом не позднее 4-х часов после взятия в термосе со льдом или хладагентом, а также можно использовать консервирующие растворы (например, 50% раствор глицерина на физ.растворе) для кусочков органов и тканей. В сопроводитель-ном письме указывают хозяйство, ферму или отделение, вид животных, пред-варительный диагноз, вид и количество патматерила, какие исследования сле-дует провести, дату и фамилию ветеринарного врача, направившего патматери-ал. Патматериал, доставленный в лабораторию, условно считают первичным, т.е. полученным непосредственно от больных или павших животных подозри-тельных на вирусную болезнь.

 

От больных животных, подозрительных в заражении вирусом, отбирают различные виды патологического материала:

 Смывы, соскобы берут ватно-марлевым тампоном или жёстким од-норазовым зондом со слизистых оболочек носа, конъюнктивы глаз, ротовой по-лости, задней стенки глотки, половых органов, прямой кишки, клоаки у птиц (например, при подозрении на вирусные пневмоэнтериты КРС, трансмиссив-ный гастроэнтерит свиней, грипп птиц и др.) и помещают во флакон с транс-портной средой (физиологический раствор, рН 7,0-7,2) с антибиотиками.

 Поражённые участки кожи и слизистых оболочек (например, при подозрении на оспу – стенку папул или корочки; на ящур – стенку афт; на кож-ную форму чумы плотоядных - стенку папул или пустул).

 Фекалии непосредственно из прямой кишки (например, при подоз-рении на ротавирусную или коронавирусную инфекции и др.).

 Кровь цельная для выделения вируса (например, при подозрении на лейкоз КРС и др.).

 Кровь для получения парных проб сыворотки крови для обнаруже-ния и определения титра антител (первую пробу берут в острый период болезни (в начале болезни), вторую – через две недели в период выздоровления), кото-рые исследуют в лаборатории одномоментно после доставки второй пробы.

 

От трупов, подозрительных в заражении вирусом отбирают кусочки различного патологического материала весом не более 5-10 грамм:

 паренхиматозных органов (печень, селезёнка, почки);

 региональных лимфоузлов

 изменённых органов и тканей;

 органов и тканей, в которых можно обнаружить вирус (например, при инфекционном ринотрахеите КРС – абортплоды, плодные оболочки; при болезни Ауэски и ньюкаслской болезни – головной мозг; при бешенстве – го-лова целиком; при классической и африканской чуме свиней – лёгкие и т.д.);

 

Блок 3




Дата добавления: 2014-12-15; просмотров: 44 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав




lektsii.net - Лекции.Нет - 2014-2024 год. (0.006 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав