Читайте также:
|
|
Аспартатаминотрансфераза(АсАТ) и аланинаминотрансфераза(АлАТ)- пиродоксальфосфатсодержащие ферменты.
АсСТ катализирует обратимый перенос аминогруппы от аспартата на α-кетоглурат с образованием глутамата и оксалоацетата.
АлАТ катализирует обратимую реакцию переноса аминогруппы от аланина на α-кетоглурат с образованием глутамата и пирувата(ПВК).
АлАТ содержиться в цитозоле, тогда как для АсАТ известны две формы: цитоплазматическая и митохондриальная.
При поражении тканей аминотрансферазы «вымываются» из поврежденных клеток в кровоток, поэтому определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови имеет важное значение, особенно для диагностики поражений сердца и дифференциальной диагностики болезней печени. Так, при неосложненном инфаркте миокарда уровень АсАТ в сыворотке крови начинает повышаться уже через 4-6 ч. после наступления инфаркта, максимум активности приходиться на вторые сутки и лишь на 5-8-й день активность фермента снижается до нормы. Изменение активности сывороточной АлАТ при этом незначительно.
При инфекционном гепатите (болезни Боткина) и обострении хронического гепатита активности обоих аминотрансфераз в сыворотке крови повышаются (активность АлАТ повышается сильнее). Цирроз печени не сопровождается значительной гиперферментемией.
Цель работы. Определить активность обеих аминотрансфераз в сыворотке крови колориметрическим методом и сравнить полученные результаты с нормой.
Принцип метода. Определение активности обеих трансфераз основано на колориметрическом обнаружении пирувата, образующегося за 1ч инкубации, по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде. В случае АлАТ пируват образуется непосредственно из аланина, а в случае АсАТ пируват образуется из оксалоацетата после декарбоксилирования последнего в щелочной среде:
Аспартат + α-Кетоглурат↔ Глутамат + Оксалоацетат
Пируват СО2
Активность обоих ферментов определяют по калибровочному графику.
Ход определения.
№ | Реактивы и этапы | Опыт | Контроль |
Субстрат для АсАТ или АлСТ, мл | 0,25 | 0,25 | |
Физиологический раствор, мл | − | 0,05 | |
Сыворотка крови, мл | 0,05 | − | |
Инкубируют 60 мин при 37°С | |||
2,4-Динитрофенилгидразин, мл | 0,25 | 0,25 | |
Перемешивают и оставляют на 20 мин при 20°С | |||
Раствор NaOH, мл | 2,5 | 2,5 | |
Через 10 мин фотометрируют против Н2О (λ= 500 нм, толщина кюветы 0,5 см). D500 | |||
Dоп−Dк |
Расчёты
Расчет активности производят в мккат/л по калибровочному графику (данные для его построения приведены в таблице).
Активность АлАТ или АсАТ, мккат/л | Dоп―Dк |
0,1 | 0,025 |
0,2 | 0,05 |
0,3 | 0,08 |
0,4 | 0,11 |
Норма: АлАТ= 0,05-0,12 мккат/л; АсАТ= 0,06-0,14 мккат/л. Верхний предел―0,42 мккат/л.
Дата добавления: 2014-12-19; просмотров: 67 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |