Читайте также:
|
|
Представляет собой совокупность всех нуклеотидных последовательностей хромосомной ДНК организма в виде фрагментов ДНК, клонированных в векторах. Если фрагменты физически картированы, т.е. установлено их расположение на хромосомах, то такую библиотеку называют геномной энциклопедией. Банки служат источником материала для изучения строения и регуляции индивидуальных генов, а также для исследования структуры и функции белков. С их помощью также можно решать проблему генофонда исчезающих видов.
Для создания банка генов осуществляют тотальное клонирование, используя для встраивания в вектор смесь фрагментов ДНК, полученную дроблением всей клеточной ДНК. Далее тем или иным способом отыскивают в банке клон с нужным геном.
Банком кДНК называют коллекцию кДНК-копий иРНК клеток конкретной ткани на определённой стадии развития организма. Типичная клетка содержит от 10 до 30 тысяч разных иРНК со средним размером 1,5 – 2 тысячи нуклеотидов, треть из которых представлена низким числом копий (менее 10 – 15 на клетку). Именно эти редкие иРНК определяют, какое число клонов кДНК необходимо отобрать, чтобы банк был представительным. Для вероятности 99% это число близко к 200 000.
Изучение кДНК может дать информацию о структурной части гена, кодирующего какой-либо белок. В это же время полная структура гена, включающая регуляторные последовательности, может быть опознана путём изучения геномных клонов. Сравнительный анализ кДНК-овых и геномных клонов позволит определить наличие интронов или иных последовательностей, отсутствующих в иРНК.
Для клонирования кДНК обычно используют плазмиды, способные включать в свой состав относительно небольшие участки чужеродной ДНК. Клонирование же протяжённых фрагментов геномной ДНК часто осуществляется при помощи бактериофага . Часть его ДНК не существенна для жизнедеятельности и репродукции фага и может быть заменена, в связи с чем такие конструкции носят название векторов замещения.
Высокомолекулярную ДНК частично гидролизуют рестриктазой до фрагментов примерно 20 000 полинуклеотидов. В свою очередь ДНК фага разрезают фрагментом рестрикции на 3 части и разделяют электрофорезом в геле. Среднюю, несущественную, часть удаляют, а «плечи» вектора соединяют с геномной ДНК. Затем проводят упаковку фага, инфицируют E.Coli для амплификации ДНК и отбирают соответствующие клоны.
Дата добавления: 2014-12-19; просмотров: 58 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |