Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Основные методы исследования морфологии бактерий. Микроскопия. Методы окраски микробов и их отдельных структур.

· микроскопический метод: световая, фазово-контрастная, флуоресцентная, электронная;

· культуральный метод (бактериологический, вирусологический);

· биологический метод (заражение лабораторных животных);

· молекулярно-генетический метод (ПЦР - полимеразная цепная реакция)

· серологический метод - выявления антигенов микроорганизмов или антител к ним;

Для световой микроскопии биологические объекты обычно окрашивают с целью выявления тех или иных их свойств. При этом ткани должны быть фиксированы, т.к. окраска выявляет определенные структуры только убитых клеток. В живой клетке краситель обособляется в цитоплазме в виде вакуоли и не прокрашивает ее структуры.

Виды микроскопов:

· световой с иммерсионной системой (всегда используется иммерсионное (кедровое) масло для повыш разрешающей способности)

· темнопольный (дифракция света при сильном боковом освещении, поле зрение темное, от м/о отражаются лучи-> «звезды на темном небе»; для изуч подвижности бактерий)

· фазово-контрастный (поле зрение –светлое, объекы- темные)

· люминесцентный (некот в-ва светятся зеленым под действием коротковолнового излучения; для обнаружения патогенных бактерий в материале)

· современный электронный (состоит из колонны, через которую в вакуум проходят е, испускаемые катодной нитью. Поток е фокусируется магнитами, а затем проходит через ультратонкий образец и фиксируется на экране)

Специальные методы окраски бактерий

Наибольшее распространение нашли методы окраски Грама и Циля-Нильсена

По Граму: 1.карболовый генциан виолет 2 мин. 2.Промыть водой. 3.Люголь 1 мин. 4.промыть водой. 5.Спирт 30 сек. 6.вода. 7. водный фуксин 2 мин. 8.вода.

По Цилю: карболовый фуксин до появления паров. 2.Дать остыть. 3.Обесцветить 1% серной кислотой 30 сек. 4.вода 5.Метиленовая синька 5 мин. 6.вода

Дифференцирующие методы окрашивания обычно применяют для окрашивания различных морфологических структур. Для окраски капсул бактерий применяют методы Хисса, Лёйфсона и Антони; последний метод наиболее прост и включает окраску кристаллическим фиолетовым с последующей обработкой 20% водным раствором CuS04. Для окраски жгутиков бактерий предложены методы Лёффлера, Бёйли, Грея и др. Для этих методов характерны первоначальное протравливание препарата и последующая окраска (чаще карболовый фуксин Циля). Окраску спор бактерий проводят после предварительной обработки их стенок. Наиболее прост метод Пешкова, включающий кипячение мазка с синькой Лёффлера на предметном стекле с последующей докраской нейтральным красным. Споры окрашиваются в синий цвет, вегетативные клетки — в розовый.

4. Морфология, ультраструктура и химический состав бактерий. Субклеточные формы бактерий: протопласты, сферопласты, L-формы бактерий.

По форме выделяют следующие основные группы микроорганизмов: Шаровидные или кокки, Палочковидные, Извитые, Нитевидные.

Кокковидные:

· Микрококки расположены в одиночку

· Диплококки- гонококк, менингококк, пневмококк.

· Стрептококки. образуют цепочки.

· Тетракокки. Деление в двух взаимоперпендикулярных плоскостях (непатогенные)

· Сарцины. Деление в трех взаимоперпендикулярных плоскостях

· Стафилококки напоминают грозди винограда. Хаотичное деление

Палочковидные (самая крупная группа)

· Бактерии- палочки, не образующие спор (большинство)

· Бациллы- аэробные спорообразующие микробы.

· Клостридии- анаэробные спорообразующие микробы