Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Перспективные направления развития проблемы восстановления кожного покрова у обожженных.

Стремительное развитие клеточной биологии обусловило появление биотехнологических методов воостановления кожного покрова. Райнвальд и Греен разработали технологию серийного культивирования эпидермальных кератиноцитов человека (ЭКЦ), которая успешно применяется для лечения тяжелообожженных. Однако, помимо высокой стоимости лечения, метод имеет еще ряд существенных недостатков. Технология выращивания пластов ЭКЦ чрезвычайно сложная и многоэтапная, культивирование клеток до состояния, пригодного для трансплантации, занимает три недели и более. Потери клеточного материала происходят уже на стадии снятия пластов ЭКЦ с поверхности культурального флакона и переноса на раневые поверхности. Применяемая для этой цели диспаза может повреждать целостность клеточной стенки. После открепления от подложки тонкий пласт клеток, состоящий из 5-7 клеток, быстро ретрагирует, в результате чего его площадь быстро уменьшается. Большое влияние на приживление клеточных пластов оказывает микрофлора ран. Пласты ЭКЦ в гораздо большей степени подвержены действию микроорганизмов по сравнению с расщепленными лоскутами кожи. Кроме того многие антисептики, традиционно применяемые в практике лечения ожоговых ран, оказывают токсическое действие на клетки.

Одним из перспективных подходов является культивирование и последующая трансплантация клеток кожи на поверхности коллагеновых микроносителей. Такая технология позволяет существенно сократить сроки культивирования, избежать необходимости ферментной обработки для снятия клеточной культуры с подложки.

После пересадки пластов ЭКЦ восстановление слоев эпидермиса происходит довольно быстро. Пересаженные на раневые поверхности пласты клеток не имеют прочной связи с подлежащими тканями и вследствии этого легко отслаиваются. Для того, чтобы улучшить качество восстанавливаемого кожного покрова была показана возможность реконструкции живой и функционирующей кожи на отдельных клеточных элементах. Для воссоздания структуры, напоминающей дерму, фибробласты кожи смешивают с коллагеном, плазмой и ростовой средой, что приводит к образованию геля, который разливается в чашки Петри и принимает ее форму. В результате функционирования фибробластов в дальнейшем происходит контракция геля, который значительно уменьшается в размерах. Сформировавшийся дермальный эквивалент (ДЭ) представляет собой полупрозрачную упругую массу. Преимуществом ДЭ является то, что в нем фибробласты находятся в функциональном состоянии, близком к таковому в коже. Кератиноциты человека, засеваемые на ДЭ после его контракции, хорошо к нему прикрепляются, размножаются и быстро формируют зрелые дифференцированные многослойные клеточные пласты.

Также успешно используется коллагеновый матрикс при трансплантации культуры фибробластов и кератиноцитов. Этот матрикс состоит из коллагеновой губки и коллагенового геля. Коллагеновая губка имеет многочисленные отверстия, которые заполняли коллагеновым гелем. Затем на комбинированный матрикс помещали пласты аутологичных кератиноцитов. Такие композиции помещают на раны пациента после осуществления некрэктомии. Через неделю матрикс растворяется, а на поверхности раны находится стратифицированный эпидермис, хорошо прикрепленный к подлежащим тканям. Уже через 10 месяцев в восстановленной коже были довольно сильно развиты сосочковый и сетчатый слои дермы.

В последнее время большое внимание уделяется сочетанному использованию традиционных хирургических методов кожной пластики и биотехнологических подходов. Наиболее часто раны, образовавшие после удаления ожогового струпа, закрывают аллогенной кожей и спустя некоторое время тангенциально иссекают эпидермис. На остатки аллогенной дермы трансплантируют многослойные клеточные пласты аутологичных кератиноцитов. Как правило приживание клеточных пластов на такого рода подложку происходит хорошо. При подобной пластике более быстро происходят регенеративные события. Более быстро завершается созревание эпидермиса и формирование крепежных фибрилл. Качество восстановленного кожного покрова хорошее.

В 1994 году Кайцер трансплантировал аутологичные кератиноциты на поверхности фибринового матрикса и поверх них накладывал расщепленные лоскуты аллокожи, консервированной в глицерине. Таким образом были закрыты поверхности на площади от 3 до 15 % поверхности тела. Качество полученной кожи было вполне удовлетворительным. При гистологическом исследовании установлено, что аллоэпидермис с течением времени отторгался, но клетки аллодермы интегрировали в неокожу. Фибриновый матрикс позволяет хорошо приклеиваться ко дну раны.

Сочетание традиционных методов кожной пластики и выращиваемых in vitro клеток позволяет эффективно восстанавливать кожный покров у тяжелообожженых.