Студопедия  
Главная страница | Контакты | Случайная страница

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Особые указания.

Читайте также:
  1. Глагол как часть речи и его неспрягаемые (особые) формы, их объединяющий признак
  2. Для полноценного решения этих задач рекомендуются следующие методические указания.
  3. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ.
  4. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ.
  5. Общие методические указания.
  6. ОСОБЫЕ ДЛЯ КАЖДОГО НАРОДА И ЭПОХИ ДЕНЬГИ
  7. Особые правила наследования установлены для некоторых видов имущества (долей в уставных фондах, вещей ограниченного доступа и т.п.).
  8. ОСОБЫЕ СИТУАЦИИ В ПОЛЁТАХ
  9. ОСОБЫЕ СЛУЧАИ ОБРАЗОВАНИЯ МНОЖЕСТВЕННОГО ЧИСЛА
  10. Особые требования, предъявляемые к психодиагностическим методикам.

 

1. Для уменьшения погрешности надо готовить исходный раствор крови для записи спектра такой концентрации, чтобы его оптическая плотность в первой изобестической точке при λ=550 нм была не менее 0.5, а в максимуме при λ=540 нм – не более 0.9 – 1.0. На практике при недостатке визуального опыта готовят 0.5% раствор исследуемой крови в 0.1% растворе аммиака. Измеряют его оптическую плотность при λ=550 нм. Если она менее 0.5, то добавляют несколько капель исходной крови к полученному раствору (если надо, то несколько раз), пока оптическая плотность крови приλ550 нм не станет близкой к 0.5.

2. Уделить максимум внимания чистоте спектрофотометрических кювет и рук оператора. Лучше работать в резиновых напальчниках, т.к. потожировые выделения от рук на рабочих поверхностях кювет могут дать увеличение оптической плотности на 0,009.

 

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБОКСИГЕМОГЛОБИНА (без насыщения)

 

Готовят 0,5% раствор исследуемой крови в 0,1% растворе аммиака, полученную смесь фильтруют через складчатый фильтр и снимают спектр в интервале от 500 нм до 600 нм на спектрофотометре, в кювете толщиной слоя 1 см, раствор сравнения 0,1 % раствор аммиака. Записывают спектр поглощения раствора испытуемой крови. Затем в измерительную и сравнительную кюветы добавляют по 4 мг дитионита натрия, осторожно перемешивают и снова записывают при тех же длинах волн оптические плотности.

Оценка результата. Сохранение двух максимумов при втором измерении, после добавления дитионита натрия, является качественной характеристикой наличия в исследуемой пробе карбоксигемоглобина.

Содержание карбоксигемоглобина в % вычисляется по значениям оптической плотности раствора крови после добавления дитионита натрия в максимуме при 540 нм – D1 и при 550 нм – D2. Коэффициенты К1=0.77 и К2=0.37.

 

(D1 – D2*К1)*100

% СОНb = -----------------------------

(D2*К2)

 

Примечание:

Расчет коэффициентов К1 и К2 находили по результатам 10 модельных определений. При этом образцы крови насыщают кислородом и окисью углерода. Коэффициенты рассчитывают по формуле:

 

К2=(D3-D0)/D2 и К1=D0/D2 ,

 

где: D0 – оптическая плотность обработанного дитионитом натрия раствора крови, содержащего дезоксигемоглобин и не содержащего карбоксигемоглобин при аналитической длине волны;

D2 – оптическая плотность раствора крови, обработанного дитионитом натрия при длине волны в изобестической точке;

D3 – оптическая плотность раствора крови, дополнительно насыщенного окисью углерода при выбранной «аналитической» длине волны.

Насыщение образцов крови кислородом производят, пропуская кислород через раствор крови в течение 10 минут. При этом кровь освобождается от метгемоглобина и остаточного карбоксигемоглобина.

Методика насыщения крови СО (II). Насыщенный оксидом углерода (II) раствор крови получают в специальном приборе, который состоит из колбы, закрытой пробкой, снабженной капельной воронкой и отводной стеклянной трубкой для выхода оксида углерода (II) из колбы, четырех склянок Дрекселя и отводной трубки. Колбу и склянки Дрекселя соединяют между собой резиновыми трубками. При отсутствии склянок Дрекселя их можно заменить колбами вместимостью 50 мл, отверстия которых закрыты пробками, снабженными двумя стеклянными трубками.

В первую колбу вносят 50 мл концентрированной серной кислоты, а в капельную воронку — 10 мл муравьиной кислоты. В 1-ю склянку Дрекселя вносят 10 %-й раствор гидроксида натрия, во 2-ю и 3-ю склянки — дистиллированную воду, а в 4-ю склянку — ½ часть раствора исследуемой крови в 0,1% растворе аммиака, предварительно насыщенной кислородом. В склянки вносят столько жидкости, чтобы трубки погружались на 2 см в жидкость.

Из капельной воронки в подогретую колбу / по каплям приливают муравьиную кислоту. Интенсивность выделения оксида углерода (II) регулируют скоростью приливания муравьиной кислоты. По мере расходования муравьиной кислоты выделение газа замедляется. В начале опыта для увеличения скорости выделения оксида углерода (II) колбу осторожно нагревают на небольшом пламени газовой горелки.

Учитывая высокую токсичность оксида углерода (II), при работе с ним необходимо соблюдать осторожность. Получение оксида углерода (II) и насыщение крови этим газом должно производиться в вытяжном шкафу с хорошей тягой.

Оксид углерода (II) из колбы пропускают через склянки Дрекселя в течение 15 мин. За это время оксигемоглобин крови полностью превращается в карбоксигемоглобин. Однако при этом в растворе может оставаться некоторое количество метгемоглобина, который необходимо перевести в дезоксигемоглобин, а затем в карбоксигемоглобин. С указанной целью после пятиминутного пропускания оксида углерода (II) от прибора отсоединяют склянку с раствором исследуемой крови, в которую вносят 5—7 мг дитионита натрия, и жидкость хорошо взбалтывают. (Осторожно! Не вдыхать оксид углерода (II)!). Затем склянку 4 присоединяют к прибору и в течение 5 мин пропускают оксид углерода (II). После насыщения оксидом углерода (II) раствор крови, содержащий карбоксигемоглобин, должен быть прозрачным.

Значение коэффициентов К1 и К2 рекомендуется проверять не реже 1 раза в год.

Газохроматографический метод обнаружения количественного определения карбоксигемглобина основан на определении оксида углерода (П) с по­мощью парофазного анализа. Обнаружение проводят непосредственно в газовой фазе или после восстановления до метана или окисления до оксида углерода (11).

1-й вариант метода. К крови добавляют карбонат или гидрокарбонат натрия. Оксид углерода (П) переходит в газовую фазу.? Ее отбирают шприцом и вводят в хроматограф. Используют детектор по теплопроводности (катарометр). Обнаружение проводят по вре­мени удерживания. Концентрацию оксида углерода (П) рассчитывают по калибровочному графику, выражающему зависимость площади пика от концентрации оксида углерода (П). В таком варианте определение оксида углерода (П) в крови возможно при его содержании 30-100%. Ошибка метода составляет 10%.

2-й вариант метода. Выделение оксида углерода (П) из крови проводят, как и в пер­вом варианте. Газовую фазу вводят в дозатор прибора. В качестве газа-носителя реко­мендован гелий, который вытесняет СО из дозатора и переносит в хроматографическую колонку с никелевым катализатором на ИНЗ-600. Под действием водорода СО восста­навливается до метана (СН4), появление которого в системе регистрируется пламенно-ионизационным детектором (ПИД). Преимущество метода в высокой чувствительности и возможности проведения анализа с малыми навесками крови (0,1 мл).

3-й вариант метода основан также на применении парофазного анализа. В паро­газовой фазе содержится смесь СО и С02 эндогенного происхождения. Используется колонка с силикагелем, на которой разделяются оксид углерода(1У) и оксид углерода(11). Это разделение фиксируется детектором. Затем оксид углерода(11) в специальной ячейке окисляется оксидом йода(У) до диоксида углерода (1У), и регистрируется общее количество С02. Концентрацию оксида углерода(11) определяют по разнице полученных пиков эндо­генного С02 и суммарного количества С02.

Метод микродиффузии. Описание метода и используемого прибора приведено ранее (см. раздел 6.6.2). Во внешнюю камеру прибора вносят 1 мл крови и 1 мл 10% раствора серной кислоты. Во внутреннюю камеру помещают 2 мл 0,1% раствора хлорида палладия в 0,1 М растворе хлороводородной кислоты. Прибор закрывают крышкой и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. При наличии в крови оксида углерода (11) во внутрен­ней камере появляется серебристая пленка металлического палладия.

PdCI2 + СО + Н20 -+ Pd + 2HCI + С02

Методика определения карбоксигемоглобина (ВОЗ, Женева, 1998) заключается в следующем. Для анализа исследуемую кровь делят на 3 части. Одну часть (А) остав­ляют без изменения, вторую часть (В) насыщают оксидом углерода до 100% содержа­ния СОНЬ и используют в качестве стандарта, третью часть (С) насыщают кислородом до полного вытеснения СО, т.е. получают 100% оксигемоглобина.

 

540 нм
579 нм
 
 
 
 
 
 
 
X, нм
 

К каждой из трех проб добавляют восстановитель дитионат натрия - NajS204- 2Н20. Регистрируют спектры поглощения всех трех растворов в области 500-620 нм и измеря­ют значение оптической плотности А при 540 и 579 нм (изобестическая точка).

Расчет содержания карбоксигемоглобина ведут по величине отношения оптической плотности А540579. Находят отношение А540579 для растворов А, В и С. Эти отношения подставляют в формулу:




Этот метод эффективен при исследовании крови, содержащей более 10% карбоксиге­моглобина. Физиологическая норма содержания карбоксигемоглобина в крови составляет от 1,5 до 3,1%, для курильщиков - <10%. Смертельная концентрация карбоксигемогло­бина в крови составляет в среднем - 60% и может колебаться в зависимости от внешних условий и особенностей организма от 40 до 80%.

 

 

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

1. Какие пути проникновения оксида углерода (II) в организм при отравле­ниях?

2. Что образуется при взаимодействии оксида углерода (II) с гемоглобином?

3. Что такое дезоксигемоглобин, оксигемоглобин и метгемоглобин и как они взаимодействуют с оксидом углерода (И)?

4. Какие основные симптомы отравления оксидом углерода (II)?

5. При каком содержании карбоксигемоглобина в крови человека может на­ступить смерть?

6. С помощью каких методов можно обнаружить карбоксигемоглобин в крови?

7. На чем основано обнаружение карбоксигемоглобина в крови при помощи качественных реакций? Почему необходимо параллельно проводить пробы с кровью, не содержащей оксида углерода (II)?

8. В чем заключается обнаружение карбоксигемоглобина методом микродиф-узии?

. Как производится количественное определение карбоксигемоглобина мето­дом спектрофотометрии в УФ-области?

 




Дата добавления: 2015-01-30; просмотров: 35 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав

1 | <== 2 ==> |


lektsii.net - Лекции.Нет - 2014-2024 год. (0.009 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав