Читайте также:
|
|
1. В центрифужную пробирку налить 0,5 мл свежеполученной крови и добавить 0,1 мл взвеси авирулентного штамма стафилококка, приготовленного по оптическому стандарту мутности с концентрацией 2 млрд микробных тел в 1 мл. Содержимое пробирки перемешать и поместить в термостат с температурой 38 °С на 1 ч, затем центрифугировать при 3 тыс. об/мин в течение 3 мин. Из верхнего (лейкоцитарного) слоя осадка приготовить мазки, высушить их на воздухе и фиксировать в течение 3 — 5 мин метиловым спиртом. Окрасить по Романовскому-Гимзе в течение 20-25 мин и изучить под микроскопом.
Провести подсчет 100 фагоцитов, определив при этом фагоцитарное число, т. е. количество лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе, выраженное в процентах, и фагоцитарную активность (количество микробов, которое в среднем приходится на один фагоцит).
2. За 36-40 ч до исследования морской свинке или крысе ввести в полость живота 5-10 мл стерильного мясо-пептонного бульона (1 % пептона) и за 1 ч - 5 мл теплого стерильного физиологического раствора для разжижения воспалительного экссудата. В качестве контроля другому животному в указанные сроки внутрибрюшинно инъецировать теплый стерильный физиологический раствор в том же объеме.
В начале занятия в брюшную полость животных медленно ввести 10-15 мл подогретой до 38°С дефибринированной крови или 3% взвеси эритроцитов птицы или лягушки. Затем через каждые 15-20 мин с помощью пастеровской пипетки или шприца брать 0,5-1,0 мл перитонеальной жидкости для микроскопического исследования.
Процесс фагоцитоза изучить с помощью окрашенных мазков перитонеальной жидкости и методом «висячей капли». Для приготовления препарата «висячая капля» 5 — 7 капель перитонеальной жидкости нанести на часовое стекло и смешать с равным количеством капель 0,1 % краски нейтральрот, приготовленной на физиологическом растворе. Затем взять стекло с лункой и сделать ободок из вазелина по краям лунки. На чистое покровное стекло в центре поместить каплю окрашенной нейтральным красным перитонеальной жидкости величиной с булавочную головку и накрыть ее стеклом с лункой так, чтобы капля проецировалась на середину лунки, но не прикасалась к ней. Затем препарат перевернуть покровным стеклом вверх и изучить под микроскопом.
При малом увеличении микроскопа с суженной диафрагмой и слегка опущенным конденсором отыскать край капли. Обнаружив фагоцитирующую клетку, поместить ее в центр поля зрения, после чего установить большое увеличение и детально проанализировать динамику фагоцитоза,
В «висячей капле» можно наблюдать все стадии фагоцитоза. Процесс внутриклеточного переваривания чужеродной, клетки (эритроцита) фагоцитом определяется по окрашиванию протоплазмы клетки в розовый, а затем в рубиново-красный цвет, что свидетельствует о переходе нейтральной реакции в кислую (в клетке появляются недоокисленные продукты обмена веществ).
Для приготовления мазка каплю перитонеальной жидкости нанести на середину одного конца чистого обезжиренного предметного стекла и с помощью шлифованного ребра другого стекла сделать длинный, широкий мазок. Высохший мазок поместить на 3-5 мин в метиловый спирт или в смесь равных частей этилового спирта-ректификата и этилового эфира на 30 мин для фиксации, затем окрашивать азур-эозином по Романовскому-Гимзе (6 мл краски на 200 мл дистиллированной воды) в течение 20-25 мин. После окрашивания мазок промыть водопроводной водой, высушить фильтровальной бумагой и исследовать под микроскопом с иммерсионной системой. Отметить и зарисовать все стадии фагоцитоза.
Контрольные вопросы
1. Понятие о резистентности. Общая неспецифическая резистентность организма и ее основные факторы.
2. Барьерные механизмы организма и их защитная роль,
3. Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.
4. Иммунная система организма, ее специфические и неспецифические компоненты.
5. Клеточные факторы иммунитета. Роль ретикуломакрофагальной системы и лейкоцитов в иммунных реакциях.
6. Фагоцитоз и его сущность. Механизмы развития фагоцитарного процесса.
7. Связь фагоцитарной реакции с реактивностью организма.
8. Особенности фагоцитоза на разных стадиях развития патологического процесса.
Дата добавления: 2015-04-12; просмотров: 23 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |