Читайте также:
|
Гной и другие виды воспалительного экссудата для лабораторного исследования можно получить экспериментальным путем, вызывая у животных различные виды острого экссудативного воспаления, а также от больных животных в амбулаторно-клинических условиях.
1. Для исследования морфологического состава гноя приготовить мазок из капли экссудата, высушить, зафиксировать и окрасить по Романовскому-Гимзе (методика подробно описана в теме 6).
Под микроскопом с иммерсионным объективом изучить морфологическую картину гнойного экссудата. Исследуя препарат на различных участках, обнаружить и зарисовать гнойные тельца на разных стадиях распада (погибшие лейкоциты в основном нейтрофильного ряда), погибшие и распавшиеся клетки поврежденной ткани, бактерии, эритроциты, нити фибрина, а также вновь образовавшиеся клетки местной ткани. В протоплазме отдельных лейкоцитов (гнойных телец) обнаружить микроорганизмы, подвергшиеся фагоцитозу.
2. Для определения величины активной реакции (pH) гноя полоску универсального индикатора опустить в исследуемый экссудат. Путем сравнения полученной окраски бумаги с индикаторной шкалой установить величину pH (нормальная pH тканевой жидкости равна 7,2-7,4).
При наличии в лаборатории автоматического рН-метра, снабженного игольчатым электродом, можно измерить pH экссудата и тканей у животного непосредственно в очаге воспаления, в центре и периферии, а также на здоровых участках. Величину осмотического давления экссудата можно измерить в криоскопе с помощью термометра Бекмана (см.: Руководство к практическим занятиям по патологической физиологии / Под ред. С. М. Павленко. М.: Медицина, 1974, с. 58 59). С помощью криоскопа определяют температуру замерзания гноя, а затем сыворотки крови с точностью до 0,1°С. Обычно точка замерзания (А) гнойного экссудата (от -0,8 до -1,5°С) значительно ниже точки замерзания сыворотки крови (от -0,54 до -0,56°С). Зная, что осмотическое давление в растворе молярной концентрации (1 г/моль на 1 л воды) равно 22,4 атм., а точка замерзания такого раствора ниже точки замерзания чистой воды на 1,85°С, легко определить величину осмотического давления гноя и сыворотки в атмосферах. Если, например, для гноя ∆ = -0,83°С, то осмотическое давление гноя = 22,4x0,83 / 1,85 = 9,99 атм.
3. Наличие различных гидролитических ферментов в экссудате и их активность можно установить с помощью простых качественных и количественных методов.
Для определения протеолитической способности гнойного экссудата свежеполученную сыворотку крови налить в чашку Петри и дать ей свернуться, нанести на поверхность сыворотки несколько капель гноя и (для контроля) одну каплю физиологического раствора. Затем чашку Петри закрыть и поместить в термостат при температуре 45-50°С. Через сутки под каплями наблюдается (при наклоне чашки) результат действия ферментов - протеолиз. Вместо сыворотки крови можно использовать 10% раствор желатина. При этом пробы можно держать при комнатной температуре.
При необходимости более полного изучения воспалительного процесса и определения степени его выраженности и стадии течения ферменты экссудата можно оттитровать. Протеолитические ферменты гноя титруют для установления наименьшего количества гноя, достаточного для расщепления определенного количества белка. С этой целью разные количества гноя смешивают с равным количеством раствора белка. О расщеплении белка под влиянием протеолитических ферментов гноя судят по результатам добавления к раствору уксусной или сульфосалициловой кислоты. Нерасщепленный белок коагулирует в кислой среде и дает муть. При полном расщеплении белка от добавления к исследуемой жидкости кислоты она не мутнеет.
При анализе экссудата на содержание амилолитических ферментов в качестве объекта переваривания берут 0,25-1,0% раствор крахмала. О степени его расщепления судят по йодной реакции, так как йод с крахмалом дает фиолетовую окраску. По мере расщепления субстрата интенсивность окрашивания меняется от фиолетовой (йод с крахмалом), фиолетово-красной (амилодекстрин), красно-фиолетовой, красной (эритродекстрин) до бесцветной (ахродекстрин).
Для количественной оценки амилолитической активности гноя в 8 пронумерованных пробирок налить по 1 мл 0,25% раствора крахмала (к 0,25 г растворимого крахмала постепенно приливают, помешивая, 100 мл кипящей дистиллированной воды) и в первые 6 пробирок добавить по каплям отстой гноя: в 1-ю пробирку 1 каплю, во 2-ю - 2 и т. д. В 7-ю пробирку (контрольную) вместо гноя налить 6 капель сыворотки крови, а в 8-ю - 6 капель физиологического раствора. Затем в первых 5 пробирках выровнять объем жидкости физиологическим раствором.
Пробирки встряхнуть и поставить в термостат на 20 мин. Затем прибавить к ним по одной капле раствора Люголя (0,3 г кристаллического йода смешать с 2 г йодистого калия, слегка растереть, добавить 300 мл дистиллированной воды), встряхнуть содержимое. По его окраске можно судить об амилолитической активности гнойного экссудата. Содержимое контрольных пробирок должно иметь синий цвет, что указывает на реакцию йода с крахмалом.
Дата добавления: 2015-04-12; просмотров: 33 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |