Читайте также:
|
|
1. Реакцию напряжения (стресс) у животных в эксперименте можно вызвать путем воздействия различными вредоносными агентами (травмой, холодом, токсинами и т. д.). Для моделирования стрессовой ситуации в организме применяются гормоны - адреналин, кортикотропин, глюкокортикоиды, которые вводят животным в больших (сверхфизиологических) дозах.
У кролика, находившегося без пищи 18-24 ч, микропипеткой взять из краевой вены уха 0,1 мл крови и определить в ней содержание глюкозы (исходный уровень) по описанной ниже методике. Затем подкожно или внутривенно ввести раствор адреналина в дозе 0,4-0,5 мг на 1 кг массы животного. Через 30 мин после инъекции адреналина снова взять пробу крови и определить содержание глюкозы.
2-3. У кролика, находившегося в течение суток на голодной диете, но без ограничения воды, взять пробу крови для анализа на содержание глюкозы, затем ввести подкожно или внутривенно инсулин из расчета 4-5 ME на 1 кг массы. В дальнейшем через каждые 15-30 мин брать из ушной вены кровь для исследования и внимательно наблюдать за состоянием животного. Кролика в период опыта держать в теплом помещении.
Через 1,5-3 ч после инъекции инсулина у кролика наступает состояние гипогликемической комы. Ознакомиться с ее клинической картиной: определить общее состояние животного, ориентировочные, поведенческие рефлексы, реакцию на различные раздражители, мышечный тонус, нарушения в координации движений, температуру тела, состояние сердечной деятельности и дыхания, изменение концентрации глюкозы в крови. Затем на фоне развития шоковых явлений внутривенно или подкожно ввести 20% раствор глюкозы из расчета 1,0-1,5 мл па 1 кг массы. После прекращения судорог и исчезновения других признаков гипогликемии снова взять кровь для определения в ней глюкозы.
4. Острый гипоинсулинизм у животных в эксперименте достигается путем полного хирургического удаления поджелудочной железы или введения в организм химического препарата — аллоксана, избирательно вызывающего некробиотические изменения в 8-клетках инсулярного аппарата. В результате возникает картина, близкая клинике сахарного диабета.
За неделю до занятия подопытному животному (собаке, кролику, крысе) натощак ввести внутривенно или подкожно 5% раствор аллоксана в физиологическом растворе из расчета 100-150 мг на 1 кг массы. Во время занятий изучить клиническое состояние подопытного животного путем сравнения его с контрольным. Взять пробы крови и мочи, определить в них содержание глюкозы и кетоновых тел. Мочу для исследования обычно берут путем катетеризации мочевого пузыря. Если в ходе опыта за определенный отрезок времени удается собрать мочу, то наряду с качественными изменениями ее состава можно отметить количественные нарушения диуреза (полиурия, поллакизурия), характерные для диабета.
Если опыт приводится на крысе, в начале занятия двум крысам (контрольной и подопытной) подкожно ввести по 20-30 мл подогретого (до 36-37°С) физиологического раствора хлористого натрия. После этого животных поместить в воронки, а мочу собрать в мерные цилиндры.
Определение глюкозы в крови и моче по цветной реакции с ортотолуидином (метод Гультмана)
Все пробы крови, полученные в ходе опытов, удобнее обрабатывать и исследовать на содержание глюкозы одновременно. Поэтому каждую пробу крови после взятия следует стабилизировать путем добавления антикоагулянта (гепарина, лимоннокислого натрия, 10% раствора ЭДТА натрия) и поместить в холодильник до конца опыта.
В центрифужные пробирки микропипеткой внести 0,1 мл крови, прибавить 0,9 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты для осаждения белков. Содержимое пробирок тщательно перемешать и центрифугировать в течение 2-3 мин. Затем 0,5 мл прозрачного центрифугата перенести в высокие тонкостенные пробирки и добавить 2,0 мл стабилизированного 6% раствора ортотолуидина в уксусной кислоте.
При определении глюкозы в моче в высокие тонкостенные пробирки отобрать 0,1 мл мочи (непременно прозрачной; мутную мочу или с примесью белка обработать как кровь) и прибавить 2,4 мл ортотолуидинового реактива.
Пробирки энергично встряхнуть несколько раз и, прикрыв отверстия алюминиевой фольгой, поместить на 8 мин в кипящую водяную баню. Содержимое пробирок быстро охладить под струей холодной воды до комнатной температуры. Параллельно с опытными пробами обработать стандартную пробу, содержащую 100 мг% глюкозы (можно серию проб от 50 до 300 мг %).
В процессе нагревания происходит реакция содержащейся в пробах глюкозы с ортотолуидиновым реактивом. Раствор приобретает зеленовато-голубую окраску, интенсивность которой пропорциональна концентрации глюкозы. Она определяется на фотоэлектроколориметре при длине волны 630 нм (красный светофильтр № 9 ФЭК-56М) в кюветах с рабочим расстоянием 5 мм.
Количество глюкозы в крови и моче рассчитать по формуле
х 100 =? мг%
где Е оп - оптическая плотность опытной пробы; Е ст - оптическая плотность стандартной пробы.
Обнаружение кетоновых тел в моче (проба Ланге)
К З-5 мл исследуемой мочи добавить 1 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5-1 мл свежеприготовленного 5% раствора нитропруссида натрия. Перемешать, а затем наслоить из пипетки 2-3 мл концентрированного (25%) раствора аммиака. При наличии ацетоновых тел в моче через 3 мин на границе двух сред образуется розово-фиолетовое кольцо.
Контрольные вопросы
1. Значение нейроэндокринных механизмов в нарушении углеводного обмена.
2. Количественные изменения содержания глюкозы в крови.
3. Гипергликемия, ее классификация, причины и механизм развития.
4. Патогенез и основные признаки сахарного диабета.
5. Нарушение углеводного обмена при сахарном диабете. Факторы, обусловливающие развитие гипергликемии и глюкозурии.
6. Нарушения жирового, белкового и водного обмена, механизм их происхождения и значение при сахарном диабете.
7. Гипогликемия. Этиология, патогенез и основные проявления гипогликемического синдрома у сельскохозяйственных животных.
8. Механизм развития и клиническая картина гипогликемической комы.
Дата добавления: 2015-04-12; просмотров: 29 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |