Студопедия  
Главная страница | Контакты | Случайная страница

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Вектори для переносу рекомб. Днк

Банки генетичних ресурсів

За даними деяких дослідників, швидкість зникання видів рослин із Землі буде наростати і до 2040 року щорічно будуть втрачатися 20-75 видів рослин. Для збереження різноманіття рослинного світу у всьому світі створюють банки генетичних ресурсів і бази даних про них. Зараз функціонує їх понад 1300.

В Україні ця робота покладена на Національний центр генетичних ресурсів рослин, що знаходиться в Інституті рослинництва ім.. В.Я.Юр'єва. Останнім разом з Інститутом проблем кріобіології та кріомедицини НАН України розроблені умови кріоконсервації багатьох видів рослин.

 

Очищення протопластів.

Від решток клітин і тканин фільтруванням крізь сита 40-150 мкм. Ферменти – центрифугуванням та 3-4 разовою промивкою в промив очному або культуральному середовищі. Використовують метод флотації в концентрованих розчинах сахарози, манітолу, фіколу.

 

 

Вектори для переносу рекомб. Днк

Векторами, які відповідають цим вимогам, можуть бути: бактеріофаг λ або частини його геному, окремі онкогенні віруси тварин, бактеріальні плазміди та епісоми.

Фаг λ, як акцептор чужерідних фрагментів ДНК може мати один сайт-мішень, до якого прикріплюється чужерідна ДНК, називається інсерціоним вектором. А вектори, які мають пару сайтів, де можна вмонтувати фрагмент чужерідної ДНК називаються переміщуємими векторами або векторами заміщення.

Серед онковірусів тварин як вектор широко використовується онковірус мавпи SV40.

Перспективними для трансгенезису (перенесення генів у вигляді фрагментів молекул ДНК від однієї клітини до іншої в межах одного або різних видів, яке не пов‘язане з природною взаємодією генів (статевим процесом або його еквівалентом у бактерій) у рослини є вектори на основі плазмід: Ті-ллазміди (Корончасті гали) Agrobacterium tumefaciens і Ri-плазміди (бородаті корені) - Agrobacterium rhirogenes.

Утворення корончатих галів на кореневій шийці відбувається в результаті проникнення бактерій A. tumefaciens через рани і трансформації генів, що відповідають за синтез бактеріальних білків, в геном рослин. Ті-плазміди (анг. tumor inducing – той, що спричиняє пухлини) є позахромосомною кільцевою молекулою ДНК з молекулярною масою близькою 1,2*108 (3-5% від розміру хромосоми агробактерії). Вони розмножуються в бактеріальній клітині автономно, тобто характеризуються незалежною реплікацією.

Повністю механізм перенесення тДНК в рослинну клітину не вивчений. Проте, відомо, що після поранення в рослинних клітинах утворюються фенольні та інші сполуки, які можуть активізувати гени vir – ділянки плазміди. Її активність спричиняє утворення одноланцюгових молекул тДНК (іноді дволанцюгових), які і переносяться в клітину рослин. Для здійснення процесу потрібна наявність правого повтору з 25п.н. Він забезпечує перенесення тДНК як в цис-, так і транс-положення відносно vir – ділянки.

Використання обеззброєних векторів дозволило: 1) переносити генетичну інформацію у рослини, не змінюючи їхнього росту та розвитку; 2) перевіряти експресію перенесених генів in vitro при функціонуванні повної програми життєздатності рослин. Ці фактори обумовили практичне використання генетичної інженерії – використання трансгенних рослин із заданими ознаками.

Цінним є використання бінарних (транс) векторів. Суть їх у можливості vir – ділянки в транс-положенні переносити в геном рослини послідовності ДНК, обмежені прямими повтореннями Т-ділянки. На підставі цього створені вектори, що мають дві плазміди в одній агробактерії. В одній плазміді видаляється Т-ділянка, але зберігається в інтактному стані vir–ділянка. В іншій плазміді між лівим та правим повторами знаходяться селективний ген та фрагмент ДНК (полілінкер) з численними сайтами транскрипції. Перевага бінарних векторів у можливості (завдяки селективному гену) добирати трансформанти і вбудовувати будь-який ген, який переноситься разом із селективним, що забезпечується полілінкером. Функціонування генів vir – ділянки однієї плазміди забезпечує перенесення в рослинні клітини послідовностей ДНК іншої плазміди, що обмежені повтореннями Т-ділянки.

 

 




Дата добавления: 2015-04-20; просмотров: 37 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав

<== 1 ==> | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 |


lektsii.net - Лекции.Нет - 2014-2024 год. (0.005 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав