Читайте также:
|
Зупинимося на загальних положеннях методики і техніки мікроклонального розмноження рослин. Перш за все тканини, які використовуватимуться для культивування повинні бути асептично ізольованими і розміщені у сприятливих умовах для органогенезу. Останньому сприяють склад живильного середовища, концентрація фітогормонів, оптимальні умови освітлення, температури, вологості.
На всіх етапах клонального розмноження рослин необхідно дотримуватися строгої стерильності. І навіть при цьому через різні причини частина матеріалу буває інфікованою, тобто підлягає бракуванню, а це значить, що роботи, виконані до цього етапу є безрезультатними. Основні роботи виконуються в таких кімнатах: для миття посуду, стерилізації середовища, посуду, матеріалів, приготування живильних середовищ, стерильної кімнати для виділення і пересадок тканин, культуральної кімнати та лабораторного приміщення.
Основні підготовчі роботи виконуються в кімнаті для миття посуду. Для цього необхідні глибокі раковини з кислотостійкого матеріалу, гаряча і холодна вода, стелажі для просушування посуди, шафи для її зберігання. Тут же встановлюють апарати для дистиляції води, а при потребі і бідистилятори.
Для приготування середовищ необхідно мати велику кількість різних ваг, pH – метр. В цьому приміщені повинно бути достатньо шаф, полок для зберігання хімічних реактивів посуди. Потрібен також холодильник для зберігання фітогормонів, концентрованих розчинів поживних речовин, електричні плитки, водяні бані, магнітні мішалки.
В кімнаті для стерилізації встановлюються автоклави, сушильні шафи. В наступному особлива стерильність дотримується в кімнаті, де підготовлюють матеріал для садіння і відбувається контакт його і живильного середовища. Асептичність може бути досягнута лише при виконанні комплексу робіт. По-перше, це стосується самої кімнати, яка стерилізується бактерицидними лампами впродовж ночі, але з розрахунку початку роботи в ній не раніше ніж через 2-3 години після виключення ламп. Впродовж години при тиску 2 атм. автоклавується також одежа, яка одівається поверху звичайної. Стерилізація додаткового матеріалу: вата, марля, фільтрувальний та інший папір, інструменти стерилізують в автоклаві 1 год. При тиску 2 атм. З цією метою можна також використовувати сушильні шафи. Для виділення меристеми тощо використовуються бінокулярні мікроскопи. Столи повинні мати легко миючу поверхню. Кожен день в цій кімнаті проводиться вологе прибирання.
Культиваційна кімната повинна бути обладнана відповідними стелажами з лампами, звичайно, денного світла, які виділяють менше тепла ніж накалювання.
Враховуючи, що посуд, інші матеріали використовують багато разів вони можуть бути джерелами інфекції. А тому, посуд тощо спочатку ретельно звільняється від решток попереднього використання, замочується на 4-6 год. В хром піку (розчин двохромовокислого калію в концентрованій сірчаній кислоті). Після цього посуд декілька разів промивають теплою водопровідною водою і ополіскують дистильованою. Новий посуд рекомендується простерилізувати з дистильованою водою впродовж 20-30 хв. при 1,5-2 атм. Вимитий посуд стерилізують в сушильній шафі при температурі 170-180 градусів впродовж 1-2 год.
У великій мірі успіх клонального мікророзмноження залежить від складу живильного середовища. Мінеральні солі ділять на макро і мікро. До перших відносять - N, P, K, Ca, Mg, а останніх - B, Mn, Zn, Cu, Co.Крім цього до складу середовищ входять амінокислоти, вітаміни, регулятори росту, добавки. У зв'язку з гетеротрофним харчуванням культивованих тканих, необхідна присутність вуглеводів.
Стосовно мінеральних компонентів склад середовища регулюється їхньою кількістю, концентрацією, співвідношенням. Азот обумовлює морфогенетичні можливості тканин. Значну роль відіграє форма азоту нітратна або амонійна.
З амінокислот найчастіше використовується гліцин або гідролізат казеїна. Для регуляції ростових процесів в середовища добавляють регулятори росту: ауксини, цитокініни, гібереліни.
Дата добавления: 2015-04-20; просмотров: 41 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |