Читайте также:
|
|
Определение зимазной активности проводят поляриметрическим методом.
Метод основан на определении скорости гидролиза глюкозы ферментами зимазного комплекса дрожжей, которая измеряется поляриметрически по изменению угла поворота плоскости поляризации реакционной среды до и после действия ферментов на субстрат. За единицу активности зимазы принимается такое количество фермента, под действием которого происходит сбраживание 1 Моля глюкозы при температуре 35 0С и рН 4,6 в течение 1 мин.
Приборы и оборудование: весы технические, поляриметр, термостат.
Посуда и материалы: пробирки, термометр, мерный цилиндр на 200 см3, фарфоровая чашка, стеклянная воронка, фильтровальная бумага.
Реактивы: 5 %-ный забуференный раствор глюкозы – 30 см3, раствор НС1 концентрацией 5 моль/дм3 – 5 см3, 30 %-ный раствор сернокислого цинка – 5 см3, 15 %-ного раствора железосинеродистого калия – 5 см3.
Расход сырья: дрожжи хлебопекарные – 5 г.
Техника определения
Навеску дрожжей массой 5 г перемешивают со 150 см3 дистиллированной воды до получения однородной суспензии. Эту суспензию используют для анализа.
В пробирку вносят 15 см3 забуференного раствора субстрата (5 %-ный забуференный раствор глюкозы) и помещают в термостат или водяную баню с температурой 35 0С на 10 мин. Затем к содержимому пробирки добавляют 15 см3 исследуемого раствора дрожжей, быстро перемешивают и выдерживают в термостате для протекания реакции 30 мин при температуре 35 0С. После выдержки ферментативную реакцию останавливают добавлением 1 см3 раствора НС1 концентрацией 5 моль/дм3. Затем в пробирку добавляют по 1 см3 осадителей (30 %-ный раствор сернокислого цинка и 15 %-ного раствора железосинеродистого калия) для осаждения белков и осветления раствора. Содержимое пробирок перемешивают, охлаждают до 20 0С и фильтруют.
Одновременно с опытом готовят контроль. Для этого в пробирку с 15 см3 исследуемого раствора дрожжей приливают сначала 1 см3 раствора НС1 концентрацией 5 моль/дм3, затем по 1 см3 осадителей и 15 см3 субстрата. Содержимое пробирки перемешивают и фильтруют. В опытном и контрольном растворах определяют угол поворота плоскости поляризации на поляриметре с линейной или круговой шкалой (в последнем случае измеренные величины поляризации следует умножить на коэффициент 2,8885) для перевода круговых градусов в градусы нормальной сахарной шкалы.
Расчет зимазной активности дрожжей (ЗСп, ед/г) проводят по формуле 10.4.
ЗСп = (10.4)
где: 0,109 – количество сбродившей глюкозы в условиях
разработанного метода в 1 см3 инкубационной смеси,
соответствующее изменению поляризации, равному 10, г;
ΔП – изменение угла плоскости поляризации, равное разности
поляризации контрольного и опытного растворов, 0С;
30 – время действия фермента, мин;
180,16 – молекулярная масса глюкозы (для перевода мкг в ммоль), г;
а – количество дрожжей в инкубационной смеси, г.
Дрожжи считаются неудовлетворительного качества, если ЗСп ≤ 15 ед/г, удовлетворительного – от 15 до 35 ед/г; хорошего качества – при активности от 35 до 55 ед/г и отличного – при зимазной активности – более 55 ед/г.
Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 14 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |