Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Определение мальтазной активности

Определение мальтазной активности проводят поляриметрическим методом.

Метод основан на определении скорости гидролиза мальтозы ферментом α-глюкозидазой комплекса дрожжей, которая измеряется поляриметрически по изменению угла поворота плоскости поляризации реакционной среды до и после действия ферментов на субстрат. За единицу активности α-глюкозидазы принимается такое количество фермента, которое гидролизует 1 Моль мальтозы при температуре 35 ⁰С и рН 6,8 в течение 1 мин.

Приборы и оборудование: весы технические, поляриметр, термостат

Посуда и материалы: пробирки, термометр, мерный цилиндр на 200 см³, фарфоровая чашка, стеклянная воронка, фильтровальная бумага.

Реактивы: 5 %-ный забуференный раствор мальтозы – 30 см³, раствор НС1 концентрацией 5 моль/дм³ – 5 см³, 30 %-ный раствор сернокислого цинка – 5 см³, 15 %-ного раствора железосинеродистого калия – 5 см³

Расход сырья: дрожжи хлебопекарные – 5 г

Техника определения

Навеску дрожжей массой 5 г перемешивают со 150 см³ дистиллированной воды до получения однородной суспензии. Эту суспензию используют для анализа.

В пробирку вносят 15 см³ забуференного раствора субстрата (5 %-ный забуференный раствор мольтозы) и помещают в термостат или водяную баню с температурой 35 ⁰С на 10 мин. Затем к содержимому пробирки добавляют 15 см³ исследуемого раствора дрожжей, быстро перемешивают и выдерживают в термостате для протекания реакции 60 мин при температуре 35 ⁰С.

После выдержки ферментативную реакцию останавливают добавлением 1 см³ раствора НС1 концентрацией 5 моль/дм³. Затем в пробирку добавляют по 1 см³ осадителей (30 %-ный раствор сернокислого цинка и 15 %-ного раствора железосинеродистого калия) для осаждения белков и осветления раствора. Содержимое пробирок перемешивают, охлаждают до 20 ⁰С и фильтруют.

Одновременно с опытом готовят контроль. Для этого в пробирку с 15 см³ исследуемого раствора дрожжей приливают сначала 1 см³ раствора НС1 концентрацией 5 моль/дм³, затем по 1 см³ осадителей и 15 см³ субстрата. Содержимое пробирки перемешивают и фильтруют. В опытном и контрольном растворах определяют угол поворота плоскости поляризации на поляриметре с линейной или круговой шкалой (в последнем случае измеренные величины поляризации следует умножить на коэффициент 2,8885) для перевода круговых градусов в градусы нормальной сахарной шкалы.

Расчет мальтазной активности дрожжей (МС_п, ед/г) проводят по формуле 10.5.

МС_п = (10.5)

где: 0,0438 – количество глюкозы, образующейся при гидролизе

мальтозы в условиях разработанного метода в 1 см³

инкубационной смеси, соответствующее изменению

поляризации, равному 1⁰, г;

ΔП – изменение угла плоскости поляризации, равное разности

поляризации контрольного и опытного растворов, ⁰С;

60 – время действия фермента, мин;

342 – молекулярная масса мальтозы (для перевода мкг в ммоль), г;

а – количество дрожжей в инкубационной смеси, г.

Дрожжи считаются неудовлетворительного качества, если МС_п ≤ 2 ед/г, удовлетворительного – от 2 до 4 ед/г; хорошего качества – при активности от 4 до 8 ед/г и отличного – при мальтазной активности – более 8 ед/г.