Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Серологические маркеры гепатита В

Примечание: * - маркеры репликации вируса

Подобно гепатиту В, гепатит С сопровождается длительной вирусемией. Но, в отличие от HBV, вирус гепатита С может быть выявлен только путем определения РНК, т. к. концентрация вирусных частиц и антигенов ниже порога чувствительности современных иммунохимических реакций. Поэтому основными маркерами НСV являются антитела, как суммарные (анти-НСV), так и к компонентам вируса (core-Ag, E1/E2, NS). Диагностическое, прогностическое и для контроля терапии имеет значение определение класса Ig (IgM, IgG).

6. Задания для уяснения темы занятия, методики вида деятельности:

6.1. Вопросы для самоконтроля:

· Назовите возможные пути заражения парентеральными гепатитами В, С, D, соответствующие группы риска и обоснуйте необходимые меры профилактики.

· Назовите серологические маркеры возбудителей парентеральных гепатитов В, С, D и метод их определения.

· Назовите арбитражный метод лабораторной диагностики парентеральных вирусных гепатитов В, С, D и выявляемые при этом маркеры.

· Назовите основные механизмы ускользания вирусов гепатитов В и С от иммунного надзора, приводящие к хронизации заболеваний.

· Назовите механизм взаимодействия вирусов гепатита В с гепатоцитами.

· Назовите возможные осложнения при парентеральных вирусных гепатитах В, С, D.

· Назовите отличительную особенность вируса гепатита D.

· В чем суть ко- и суперинфекции при гепатите D; прогноз развития заболевания.

· Назовите наиболее надежный способ профилактики гепатита В.

· Скажите, что Вы сделали или делаете для того, чтобы не заразиться парентеральными гепатитами В, С, D.

· Назовите спектр защитного действия вакцин для профилактики гепатита В.

6.2. Решение ситуационных задач:

Задача 1. В инфекционное отделение ГБСМП поступила больная 25 лет с предварительным диагнозом «гепатит». Объективно у больной увеличение печени и селезенки, моча окрашена в темный цвет (цвет «пива»). Из анамнеза: четыре месяца назад лечилась у стоматолога.

Ваши предположения по поводу этиологии заболевания. Материалы исследования и методы лабораторной диагностики?

Задача 2. Больная Ш. 48 лет. По профессии - процедурная медсестра туберкулезного стационара. В течение недели отмечает общую слабость, боли в мышцах, суставах рук и ног. Еще до этого появился кожный зуд. Испытывает почти постоянное подташнивание, однократно была рвота. Потеряла аппетит. В первые дни болезни повышалась температура (37,5-37,8⁰с). В гепатологический центр направлена только после появления желтухи.

Ваши предположения по этиологии заболевания. Материалы и методы диагностики, которые вы будете использовать в данном случае?

Задача 3. Больной Г. 38 лет. Страдает хроническим алкоголизмом, последние 1,5 года нигде не работает. Болен 10 дней, однако за помощью не обращался. По словам матери, его постоянно тошнило, была рвота. Последние 3-4 дня практически полностью отказывался от пищи. Согласно анамнестическим данным, последние 2 месяца алкоголь не употреблял. Доставлен машиной «скорой помощи», вызванной только после появления желтухи. При поступлении состояние тяжелое, сознание сохранено. Предположить этиологию заболевания? Как это можно подтвердить при помощи методов лабораторной диагностики?

6.3. Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите диагностику парентеральных гепатитов В, С, D для чего:

1.1. Учтите и оцените результаты ИФА для выявления НВsАg в сыворотках крови обследуемых:

- А, В, С – наркоманы, использующие внутривенное введение наркотиков;

- D – лицо, занимающееся коммерческим сексом;

- Е – провизор, не вакцинированный против гепатита В;

- F–жена наркомана, использующего внутривенное введение наркотиков;

- G, Н – контроли (К+, К-).

Основным маркером HBV при скрининговых исследованиях с целью диагностики гепатита В и при проверке донорской крови является HВsAg. Он обнаруживается через 3-5 недель после заражения и за 4-5 недель до клинических симптомов. Для его выявления используют ИФА (см. занятие №33). В лунки полистироловых панелей с антителами к HВsAg вносят исследуемые сыворотки, инкубируют и отмывают от несвязавшегося антигена. Затем в лунки вносят антитела к HВsAg, меченные пероксидазой (конъюгат), инкубируют; несвязанный конъюгат отмывают. Добавление субстракта (ортофенилендиамина-ОФД) позволяет учесть результаты реакции. Образование продукта,окрашенного в желто-коричневый цвет, учитывается как положительная реакция.

Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей HВsAg (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей HВsAg (К-).

1.2. Учтите и оцените результаты ИФА с сыворотками тех же обследуемых на антитела к вирусу гепатита С (анти-НCV).

Для определения анти-НCVс помощью ИФА в лунки полистироловых панелей с адсорбированными рекомбинантными / синтетическими HСV-пептидами вносят сыворотки обследуемых и инкубируют. Не связавшиеся антитела удаляют промыванием буферным раствором. Затем в лунки вносят антитела к иммуноглобулинам человека, меченные пероксидазой. Если в исследуемой сыворотке присутствовали искомые антитела, то на данном этапе они, выступая в качестве антигенов, прореагируют с меченными античеловеческими антителами. Добавление после промывания субстрата (ОФД) позволяет учесть результат реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет учитывается как положительная реакция.

Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей анти-HСV (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей анти-HСV (К-).

На основании полученных результатов сделайте вывод и занесите результат в протокол.

1.3. Учтите и оцените результаты ИФА с сыворотками тех же обследуемых на Ig G к вирусу гепатита D.

Для определения антител класса G к вирусу гепатита D с помощью ИФА в лунки полистироловых панелей с адсорбированными антителами к Ig G человека вносят сыворотки обследуемых. После инкубации планшет промывают. Вторая инкубация планшета осуществляется с добавлением HD-core-Ag и конъюгата моноклональных антител к HD-core-Ag c пероксидазой. После промывки лунок от не связавшихся компонентов добавляют субстрат.

Критерием положительной реакции является образование желто-коричневого продукта.

Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей Ig G анти-НDV (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей Ig G анти-НDV (К-).

На основании полученных результатов сделайте вывод и занесите результат в протокол.

II. Ознакомьтесь и опишите в протоколе вакцины для профилактики гепатита В: Engerix B, H-B-Vax II, указав, что они содержат, для чего и как применяются.