Читайте также:
|
Первый день.
Знакомство с правилами иммунологической лаборатории.
Инструктаж по ТБ.
· Работать в лаборатории необходимо в халате, защищая одежду и кожу от попадания и разъедания реактивами и обсемененности микроорганизмами.
· Каждый должен работать на закрепленном за ним рабочем месте. Его следует поддерживать в чистоте, не загромождать его посудой и побочными вещами.
· Разливать концентрированную азотную, серную и соляную кислоты следует только при включенной вентиляции в вытяжном шкафу.
· Запрещается пипетирование ртом.
· Разлитые кислоты или щелочи необходимо немедленно засыпать песком, нейтрализовать, и только после этого проводить уборку.
· При попадании на кожу или одежду кислоты, надо смыть ее большим количеством воды, а затем 3-5% раствором питьевой соды или разбавленным раствором аммиака.
· При попадании на кожу или одежду щелочи, после смывания ее большим количеством воды, нужно провести обработку 2-3% раствором борной, лимонной или уксусной кислотами.
· В лаборатории запрещается принимать пищу, пить воду.
· При случайном попадании биологического материала (особенно микроорганизмов) на стол, руки, нужно провести обработку дезинфекционным раствором (например, хлорамином).
· После работы необходимо тщательно вымыть руки с использованием дезинфекционных средств (детергентов).
Второй день.
Метод розеткообразования для определения Т- и В-лимфоцитов
в периферической крови.
Принцип.
Поверхностные рецепторы, специфичные для различных субпопуляций лимфоцитов, проявляются, связывая эритроциты, нативные или нагруженные антителами к этим рецепторам. Эритроциты образуют с поверхностью лимфоцита фигуру розетки. За розетку принимают лимфоцит, присоединивший 3-5 эритроцитов. В ряде случаев эритроциты плотно окутывают лимфоцит, образуя так называемую морулу. Интерпретация этого феномена крайне разноречива. Нередко он отражает методические неточности постановки. Феномен розеткообразования может быть усилен путем обработки эритроцитов нейраминидазой.
Определение Т-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК).
Принцип.
Тимусзависимые Т-лимфоциты имеют рецепторы для эритроцитов барана, которые выступают, таким образом, специфическим маркером для их распознавания (Е-РОК: Erythrocyte — розеткообразующие клетки).
Приборы и оборудование:
1. Центрифуга ЦЛК-1.
2. Холодильник (бытовой).
3. Термостат.
4. Микроскоп люминесцентный (МЛ-2 или другие типы).
5. Камера Горяева.
6. Счетчик клеток.
7. Автоматические пипетки или микропипетки.
8. Пробирки силиконированные или пластиковые.
9. Штатив для пробирок.
Реактивы:
1. Среда 199, раствор Хенкса.
2. Гепарин (готовят раствор из расчета 25 ЕД/мл крови).
3. Фосфатный буфер рН 7,4.
4. 0,01 % раствор акридинового оранжевого.
5. 0,1 % раствор эозина, 0,1 % раствор трипанового синего на дистиллированной воде.
6. Гипак (изопак, верографин, уротраст).
7. Фиколл400 (полисахарид с молекулярной массой 400000).
8. Эритроциты барана.
Дата добавления: 2015-02-22; просмотров: 87 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |