Читайте также:
|
Гепаринизированную кровь разводят в 3 раза культуральной средой и аккуратно наслаивают на градиент фиколла. Кровь задерживается над фиколлом и не смешивается с ним. Постепенно эритроциты склеиваются фиколлом и опускаются на дно пробирки. Гранулоциты, имеющие плотность большую, чем седиментирующий раствор, оседают вместе с эритроцитами. Лимфоциты вместе с моноцитами остаются в интерфазе, их собирают, переносят в другую пробирку и отмывают центрифугированием.
Ход определения:
10 мл гепаринизированной крови человека разводят в 3 раза (1 часть крови и 2 части питательной среды). Разведенную кровь наслаивают на раствор фиколл-урографина в соотношении 1:3 (1 часть фиколла и 3 части разведенной крови). Кровь остается над раствором фиколла и не смешивается с ним. Проводят центрифугирование при комнатной температуре.
После центрифугирования собирают интерфазное кольцо, содержащее мононуклеарные клетки, в отдельную пробирку. Эритроциты склеиваются фиколлом и оседают на дно пробирки вместе с гранулоцитами. Суспензию мононуклеарных клеток трижды отмывают средой 199, центрифугируя по 7мин при 1000 об\мин.
Подсчет розеткообразующих клеток:
Из пробирки удаляют 0,2 мл надосадочной жидкости и клетки суспендируют осторожным покачиванием до исчезновения осадка. Пастеровской пипеткой набирают суспензию и одну каплю помещают на стекло, накрывают покровным. Объектив на 40 или 60. В каждом поле зрения подсчитывается количество лимфоцитов с 1-2 эритроцитами («нерозетки») и количество лимфоцитов с 3 и более эритроцитами (розетки).
Дата добавления: 2015-02-22; просмотров: 83 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |