Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Результаты выделения геномной ДНК из крови КРС, молочно-товарная ферма МК1, база №4, Куйбышевский район, Акмолинская область

Напряженная мышца снижает уровень энергии, блокирует подвижность, а также ограничивает уровень экспрессии человека. Работа с телом включает массаж, специальные напряженные позы, дыхание и упражнения на экспрессию (катартические техники).

Диагностика блоков. Клиент укладывается на кушетке на спину. Осмотр осуществляется по следующей схеме:

1) его дыхание (дышат ли грудь, живот и входит ли дыхание в таз);

2) насколько при дыхании эластична грудная клетка (насколько грудная клетка податлива надавливанию);

3) насколько человек может сознательно дышать животом (терапевт кладет руку на живот клиента и просит, чтобы тот подышал);

4) грудь и живот (путем ощупывания определяется степень болезненности или ощущение щекотки, насколько живот выпущен и т. п.);

5) бедра (посредством интенсивного ощупывания определяется степень болезненности или ощущение щекотки). Особый интерес представляет внутренняя поверхность бедра. Выявляется степень напряженности мышцы или ее «киселеобразность». И напряженная, и «киселеобразная» мышцы являются блокированными в смысле прохождения энергии;

6) ягодицы (техника та же);

7) насколько блокирован таз (подвижность таза вперед-назад при дыхании, вхождение дыхания в таз).

8) Предлагается следующее упражнение: встать, слегка согнув колени, ноги на ширине плеч, тяжесть тела сосредоточена на основании пальцев ног. Нужно как можно дальше отставить таз, при этом немного сгибая ноги в коленях, и сделать движение освобождения кишечника. В этом случае расслабляются мышцы тазового дна. Затем мышцы тазового дна следует «поднять» — они сокращаются. Человек может не чувствовать разницы между сокращением и расслаблением мышц тазового дна, и это свидетельствует о напряженности этих мышц (человек не может их расслабить). Человек также может почувствовать, что лишь сознательное усилие освобождает мышцы тазового дна, которые затем самопроизвольно сокращаются. Генезис напряжений мышц тазового дна связан либо с ранним «тренингом чистоты» (слишком ранним приучением к горшку), либо с ранними мастурбационными запретами, либо может относиться к мастурбационным запретам пубертатного периода.

9) степень напряжения мышц задней поверхности шеи и плеч (важно проверить напряжение паравертебральных мышц цервикального отдела позвоночника, особенно в месте соединения шеи с черепом (техники проверки, как в п. 4));

10) горловые зажимы (проявляются в тихом, несколько завышенном голосе, в возникновении «комка» в горле, спазмах горла при волнениях, достаточно частых подташниваниях при одновременной трудности инициации рвоты);

11) напряжение круговых мышц рта (при привычном хроническом напряжении этих мышц напряжение не осознается, при пальпации верхняя и нижняя губы напряжены, плотно сомкнуты, имеются специфические круговые морщины вокруг рта, нижняя губа может выступать вперед, обнаруживая тенденцию вызова);

12) напряжение жевательных мышц (как в п. 4);

13) напряжение круговых мышц глаз (наличие радиальных морщин, затуманенного взора, «неживых» глаз, отсутствие слез при плаче — признаки глазного блока);

14) уровень укоренения (об этом см. выше).

Упражнение 2. «Выпускание» живота. Исходное положение — стоя, ноги на ширине плеч. Легко согнуть колени. Не отрывая пяток от пола, перенести на них вес тела. После этого — как можно сильнее «выпустить» живот. Дыхание свободное, ртом. Цель упражнения — ощущение напряжения в нижней части тела.

Упражнение 3. «Лук» (рис. 4.6, б).

Исходное положение — ноги на ширине плеч. Положить кулаки на область крестца и как можно сильнее прогнуться назад, как натягиваемый лук. Это упражнение также направлено на «освобождение» мышц живота. Если имеются хронически напряженные мышцы, то человек, во-первых, не в состоянии выполнить упражнение правильно (рис. 4.7, а-г),а во-вторых, ощущает боль, препятствующую выполнению упражнения.

Одно из важнейших условий биоэнергетической работы — отсутствие сознательного форсирования дыхания. Поэтому если дыхание поверхностно, то его сознательная стимуляция носит искусственный характер. Поэтому используются некоторые техники, спонтанно углубляющие дыхание.

Упражнение 4. Человек ложится на валик (например, из одеяла), который лежит на табурете высотой 0,5 м (рис. 4.8).

Дыхание ртом. В этой позиции хорошо растягиваются мышцы спины, которые при этом расслабляются, «отпуская» грудь. Дыхание самопроизвольно углубляется. Возможна боль в спине. Если она невелика (и у пациента нет патологий позвоночника), следует продолжать упражнение, и боль уйдет.

Это упражнение настолько энергетически раскачивает подавленные эмоции и ослабляет мышечные блоки, что часто возникает феномен неосознанной экспрессии — возникают плач, рвота. Такая ситуация означает, что биоэнергетическая работа опередила аналитическую. В таком случае нужно ускорить аналитическую работу, так как пациент должен понимать, что с ним происходит.

Упражнение 5 освобождает горловые зажимы и стимулирует спонтанное углубление дыхания. Это же упражнение подталкивает к плачу (а возможно, и к крику). В позиции сидя следует расслабиться (насколько это возможно), а затем выдыхать стоп (один стон на один выдох, который делается как можно дольше). Затем нужно постараться сделать стон и на вдохе. После трех полных циклов стон следует заменить на звук «У-у-у». Когда выход достигает живота, обычно начинается плач, при этом клиент не чувствует никакой грусти. Плач является главным средством исправления дыхания и освобождения напряжения, особенно у детей.

Теперь опишем ряд упражнений на снятие блоков с мышц таза.

Упражнение 6. «Вращение бедрами». Исходное положение — стоя, ноги на ширине плеч. Вес тела сосредоточен на пальцах ног, живот выпущен. Руки лежат на бедрах. В этой позиции человек вращает бедрами слева направо. Это движение должно захватить таз и минимально — верхнюю часть корпуса и ноги. Дыхание свободное, ртом. Необходимо проделать 12 движений в одну сторону, затем столько же в другую. При выполнении упражнения следует обратить внимание на то, сдерживается ли дыхание, сохраняется ли тазовое дно расслабленным, а анальное отверстие открытым, согнуты ли колени.

Нельзя утверждать, что если человек легко делает это упражнение, то он свободен от генитальных напряжений и сексуальных проблем. Но можно утверждать, что если человек не в состоянии легко выполнить это упражнение, то он имеет сексуальные проблемы. Очень важно, чтобы при выполнении этого упражнения человек был укорененным, иначе движениям таза недостает эмоциональной окраски.

Упражнение 7. Движение тазом. Это упражнение помогает осознать напряжение в тазе и нижней части спины. Исходное положение — лежа на спине на полу, ноги согнуты в коленях так, чтобы ступни располагались на полу. На вдохе — упор ягодицами в пол и выпускание живота, на выдохе — таз немного приподнимается, стопы надавливают на пол (укоренение). Упражнение повторяется в течение 15-20 дыхательных движений. Дыхание свободное, ртом. Важно, чтобы в этом упражнении дыхание было брюшным и «шло в таз», дыхательные движения и движения таза должны быть скоординированы, а ягодицы расслаблены. Если стопы теряют ощущение контакта с полом, это означает, что таз не свободен в своих движениях.

При наличии напряжения в нижней части тела человек склонен подталкивать таз вверх вместо того, чтобы позволить ему свободно колебаться в тазобедренных суставах. В этом случае таз выносится вверх напряженными мышцами живота и напряженными ягодицами. Такое движение таза блокирует его спонтанные движения и редуцирует сексуальный опыт.

Результаты выделения геномной ДНК из крови КРС, молочно-товарная ферма МК1, база №4, Куйбышевский район, Акмолинская область

Дизайн праймеров
В таблице 1 представлены последовательности праймеров и зондов, которые сравнивали по эффективности применения в ПЦР для выявления последовательностей провируса ВЛКРС (группы олигонуклеотидов №1-4, таблица 1) и в качестве внутреннего контроля - для амплификации участков ядерного или митохондриального геномов Bos taurus (группы олигонуклеотидов №5-8). Схема генома ВЛКРС и последовательности амплификатов с указанием положения праймеров и зондов приведена на рис. 1.
Для нацеливания праймеров и зондов на консервативные участки вирусного генома последовательности соответствующих генов загружали из базы Genbank и строили множественные сравнения (элайнменты). Были построены элайнменты 6-ти последовательностей полноразмерных геномов ВЛКРС, депонированных в Genbank, 62-х последовательностей области LTR, 100 последовательностей гена env, 39-ти последовательностей гена pol. Все выбранные последовательности праймеров были предварительно проверены in silico на специфичность с использованием программы Primer-BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/).
Дизайн праймеров и зондов проводили с использованием программы Beacon Designer 7.9 (Premier Biosoft, Inc.). При выборе последовательностей олигонуклеотидов для ПЦР учитывали следующие параметры: расчётная температура отжига праймеров находилась в пределах +58°С …+60°С, а для зондов +68°…+70°С; не допускали наличие нуклеотида G на 5‘ конце подобранного зонда; исключали последовательности, содержащие тринуклеотид GGG. [Рисунок-1]

A. Схема генома ВЛКРС. Затемнёнными прямоугольниками над генетической картой показаны фрагменты генома, используемые в качестве мишеней в ПЦР. B. Последовательности амплификатов с указанием положения праймеров и зондов

Оптимизация реакционных условий ПЦР
В ходе первоначально выполненных экспериментов выбрали наиболее эффективно работающие праймеры и зонды. Эффективность системы ПЦР оценивали по её способности дискриминировать пробы от коров, имеющих и не имеющих серологические маркёры, и по номеру критического цикла (Ct), т.е. цикла, в котором флуоресценция образца превышает вычисленное пороговое значение (чем Ct меньше, тем эффективнее амплификация). Наилучшие результаты были показаны для праймеров ENV-S1, ENV-AS1 и зонда ENV-P1 (для выявления провируса), праймеров 18S2AS, 18S2S и зонда 18S2Pro (внутренний контроль).
Дальнейшую оптимизацию ПЦР проводили, варьируя концентрации праймеров и зондов. В каждом эксперименте парные прямой и обратный праймеры использовали в равной концентрации. Для праймеров ENV-S1, ENV-AS1, 18S2S, 18S2AS были испытаны три рабочие концентрации (0,2 пМ/мкл, 0,4 пМ/мкл, 0,8 пМ/мкл), для соответствующих зондов - две рабочие концентрации (0,1 пМ/мкл, 0,2 пМ/мкл). Результаты типичного эксперимента по оптимизации отношения концентраций праймер/зонд показаны на [Рисунок-2]

Результаты ПЦР в реальном времени для выявления последовательностей провируса ВЛКРС в зависимости от концентрации праймеров ENV-S1, ENV-AS1 и зонда ENV-P1

В качестве матрицы для амплификации в данном эксперименте использован один образец ДНК от серопозитивной коровы. Были найдены оптимальные концентрации праймеров и зондов для ПЦР-РВ в мультиплексном варианте. В дальнейшей работе праймеры ENV-S1, ENV-AS1 использовали в рабочей концентрации 0,8 пМ/мкл, зонд ENV-P1 - 0,2 пМ/мкл; праймеры 18S2S, 18S2AS - 0,2 пМ/мкл, зонд 18S2Pro - 0,2 пМ/мкл.
Результаты исследования 10-ти проб крови КРС (таблица 1) в мультиплексной ПЦР-РВ показаны на рис. 3. Результаты исследования легко интерпретируемы: внутренний контроль (фрагмент гена 18S рРНК) амплифицируется во всех пробах 36П-8П (рис. 3а). Последовательности провируса ВЛКРС выявлены в 4 образцах (4/11, 36%) (рис. 3б). [Рисунок-3]