Студопедия  
Главная страница | Контакты | Случайная страница

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

I Крестьянская реформа 1861 г.

Читайте также:
  1. XX съезд КПСС и его историческое значение. Реформаторская деятельность Н. С. Хрущева.
  2. Аграрная реформа (1906г.)
  3. Аграрная реформа Столыпина
  4. Аграрный вопрос в программах партий и столыпинская аграрная реформа.
  5. Альтернативы российским "реформам сверху" в XIX в.
  6. Военная реформа
  7. Военная реформа Петра I ввела в России
  8. Военная реформа Петра. Начало Северной войны.
  9. Военная реформа.
Помощь в написании учебных работ
1500+ квалифицированных специалистов готовы вам помочь

 

Чаще всего в вирусологии в качестве биомоделей используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов, цыплят. Иногда используют также золотистых хомячков, утят и других животных. Условия использования лабораторных животных в качестве биомодели: Животные должны быть здоровы, получены из благополучного в отношении заразных болезней питомника, чувствительны к конкретному вирусу, стандартны (то есть одинаковы по полу, физиологическому состоянию, весу). Выбор лабораторных животных зависит от вида вируса.

Иногда при первом заражении у лабораторного животного не проявляются клинические признаки и патологоанатомические изменения, оно не погибает и остаётся здоровым. Тогда приходится проводить 3-5 «слепых», бессимптомных пассажей (перезаражений), прежде чем удастся адаптировать вирус к лабораторным условиям. Однако к некоторым вирусам лабораторные животные в принципе не чувствительны, в этом случае приходится использовать естественно восприимчивых животных, как, например, при чуме свиней и инфекционной анемии лошадей.

Цель заражения лабораторных животных:

1. Изучение патогенеза болезни;

2. Выделение вируса из пат.материала;

3. Наработка иммунных и гипериммунных сывороток;

4. Наработка вакцин;

5. Поддержание вирусов в условиях лаборатории;

6. Титрация, с целью определения количества вируса в единице объема;

7. Лаб. Животные - биологическая модель для постановки реакции нейтрализации;

Различают много способов введения вируссодержащего материала в организм животных:

- Подкожный; - Интрацеребральный;

- Внутрикожный; - Интраперитониальный;

- Внутримышечный; - Интраокулярный;

- Внутривеннвй; - Интранозальный;

- Алиментарный;

Выбор метода заражения лабораторных животных зависит от тропизма вируса. Так, при культивировании нейротропных вирусов животных заражают интрацеребрально (в головной мозг); респираторных - интраназально, интратрахеально; дерматропных – подкожно и внутрикожно.Заражение производят с соблюдением правил асептики и антисептики.

 

После заражения животных метят, помещают в изолированный бокс и ведут наблюдение в течение 10 суток. Гибель животного в первые сутки после заражения считается неспецифичной и в дальнейшем не учитывается. 3 признака указывают на результативность заражения: наличие клинических признаковгибель животного; патологоанатомические изменения в их органах и тканях.

 

2. Выделение вирусов на куриных эмбрионах

Куриный эмбрион - это оплодотворенное куриное яйцо, в котором развивается зародыш (эмбрион). Культивирование вирусов на куриных и перепелиных эмбрионах в последнее время получило широкое распространение как один из наиболее простых и надежных методов культивирования и диагностики многих вирусов и некоторых бактерий - бруцеллы, риккетсии, вибрионы.

Многие вирусы человека и животных способны культивироваться в развивающихся куриных эмбрионах. Эмбриональная ткань, особенно оболочки эмбриона, богатые тканями зародышевого эпителия, является благоприятной средой для размножения многих вирусов. Вирусы, имеющие эпителиотропные свойства (оспа, ИЛТ и др.), успешно развиваются на хорионаллантоисной мембране, вызывая макроскопически видимые изменения. Различные представители миксовирусов (грипп, болезнь Ньюкасла, чума плотоядных и др.), вирусы инфекционного бронхита, гепатита утят, арбовирусы и др. хорошо размножаются в эмбрионе при введении материала в аллантоисную полость. Некоторые вирусы успешно культивируются в желточном мешке.

Преимущества использования куриных эмбрионов:

1.Экономически выгодно, кроме того яйца легко доступны;

2.У развивающихся куриных эмбрионов отсутствуют защитные механизмы, т.к. система иммунитета еще не развита;

3.Скорлупа яиц препятствует проникновению через неё бактерий и вирусов из окружающей среды;

4.Для культивирования и выделения вирусов на куриных эмбрионах требуется очень несложное оборудование - обычный термостат или инкубатор.

Условия использования КЭ в вирусологии:

1.Яйца получают из хозяйств заведомо благополучных по инфекционным заболеваниям;

2.Куриные эмбрионы лучше получать от белых пород кур (леггорн, русская белая), т. к. они более устойчивы к манипуляциям и не гибнут от маленьких травм. Кроме того, у них скорлупа белая и более прозрачная, чем у других пород, и легче просвечивается, что удобно для просмотра и наблюдения в процессе работы с ними;

3. Для инкубирования отбирают оплодотворенные яйца снесенные не более 10 суток тому назад;

4. Берут незагрязненные яйца, т. к. мыть их перед инкубированием нельзя, а грязные яйца хуже просвечиваются при просмотре (овоскопии) и при работе с ними можно инфицировать эмбрион в процессе манипулирования;

Инкубируют яйца в инкубаторе или в термостате с водяным нагревом и доступом воздуха, причем в процессе инкубации в термостате яйца 2-3 раза в сутки нужно переворачивать и для лучшего газообмена вынимать на 5-10 минут на воздух. Для поддержания определенной влажности в термостат ставят сосуд с водой для испарения, температура в термостате должна быть 38°.

Развитие зародыша происходит уже в первые сутки инкубирования, происходит закладка головного мозга, скелета. Строение куриного эмбриона в возрасте 7-9 дней ( см. тетрадь).

Для заражения наиболее часто используют эмбрионы 7-12 суточного возраста. Работу с куриными эмбрионами проводят в стерильной комнате-боксе со строжайшим соблюдением асептики .

Цель заражения куриных эмбрионов:

1. Выделить вырус из патматериала;

2. Наработка вакцин;

3. Поддержание вируса в условиях лаборатории;

4. Титрация вирусов;

5. Биологическая модель для постановки реакции нейтрализации;

6. Изучение интерференции вирусов и наработка интерферона;

Заражение куриных эмбрионов:

Для заражения нужно отбирать жизнеспособные эмбрионы с хорошо выраженной подвижностью. Перед заражением все эмбрионы тщательно просматривают в затемненной комнате на овоскопе

Во время просвечивания эмбрионов перед заражением на скорлупе простым карандашом обрисовывают пугу (воздушную полость), ход крупных кровеносных сосудов и место предлежания эмбриона, т. е. участок на скорлупе, где ближе всего к ней лежит эмбрион. Отметка пуги, места предлежания эмбрирна и хода крупных кровеносных сосудов затем служат ориентиром при выборе места введения вируссодержащего материала в момент заражения.

Отобранные для заражения куриные эмбрионы переносят в бокс, где и проводят с ними работу. Перед заражением скорлупу по месту введения материала дважды обрабатывают йодированным спиртом и обжигают. Доза заражения составляет 0,1-0,2 смз.

В зависимости от вида вируса и цели заражения имеются различные методы введения вируссодержащего материала:

1) Заражение на хорионаллантоисную обалрчку, используют эмбрионы 7—12-суточного возраста при выделении и культивировании нейротропных, дерматропных н некоторых пантропных вирусов (оспа, энцефаломиелит, ИЛТ, ящур, бешенство, чума и др.). Существует 3 варианта заражения:

а)вскрывают пугу и срезают ее ножницами, отделяют
подскорлупную оболочку и наносят на хорионаллантоисную
оболочку (ХАО) материал. Отверстие в яйце затем закрывают
стерильным стеклянным колпачком и края колпачка
парафинируют;

б) выпиливают надфилем (напильничек) или зазубренным скаль­-
пелем в скорлупе треугольник с длиной сторон около 1 см на
границе пуги со стороны предлежания эмбриона, пинцетом
удаляют участок скорлупы и подскордупной оболочки и вводят
материал. Отверстие закрывают покровным стерильным
стеклом и края парафинируют, или заклеивают стерильным
лейкопластырем.

в)скальпелем удаляют небольшой участок скорлупы площадью
около 0,5 см по месту предлежания эмбриона, затем пинцетом
или иглой удаляют в этом участке подскорлупную оболочку и
вводят материал. Если материал плохо входит в полость яйца, можно с помощью резиновой груши через отверстие в скорлупе на пуге откачать воздух из пуги и в результате по месту введения материала образуется искусственная пуга и тогда материал легко вводится. Отверстие в скорлупе закрывают лейкопластырем или парафинируют.

2) Заражение в аллантоисную полость. Этот метод заражения
очень прост и применяется для выделения многих вирусов. Для
заражения берут 10-11-дневные эмбрионы. Имеется два варианта
заражения:

а) заражение проводят через пугу, не срезая ее. Иглой отмеряют
расстояние от верхушки пуги до границы пуги, отмеченной
карандашом на скорлупе, и вводят иглу на отмеченную глубину
и углубляют еще на 0,5 см, чтобы проколоть
хорионаллантоисную оболочку;

б) вводят материал иглой через прокол в скорлупе в месте
предлежания эмбриона на глубину 3-5 мм в бессосудистом
участке. Отверстие в скорлупе закрывают лейкопластырем или парафинируют.
3) Заражение в желточный мешок.

Для заражения используют 5-8-суточные эмбрионы.

Существует два варианта заражения:

а) иглу вводят со стороны пуги в желточный мешок под углом 45о

к месту предлежания эмбриона под контролем овоскопа;

б) яйцо кладут на подставку также местом предлежания
эмбриона вниз и иглу вводят сверху вниз по направлению к
эмбриону на глубину около 1 см.

Место введения заклеивают лейкопластырем и парафинируют.

4)Заражение в амниотическую полость.

При этом методе заражения вирус может проникнуть

в различные клетки,находящиеся в контакте с амниотической

жидкостью, и размножаться в них. для удобства заражения

рекомендуется за 2-3 дня до проведения заражения эмбрионы

инкубировать пугой вверх. Тогда эмбрион и амнион смещаются вверх

и удобнее заражать. Имеется два варианта заражения:

а) вскрывают и срезают пугу, пинцетом удаляют подскорлупную
оболочку и захватывают амниона подтягивают амнион
пинцетом и вводят в амниотическую полость материал в дозе
0,1 мл. Отверстие в скорлупе затем закрывают стерильным
стеклянным колпачком и края парафинируют;

б) заражение с помощью длинной иглы через пугу в темной
комнате под контролем глаза, У иглы предварительно острие
загибают под прямым углом, чтобы получилась маленькая
площадка. Иглу вводят под контролем глаза через пугу до эмбриона,

под давлением затупленной иглы эмбрион в этом случае будет

смещаться, затем легким толчком прокалывают амнион и иглу

слегка оттягивают назад. При этом эмбрион должен смещаться за иглой вверх.

Затем вводят материал.

5) Заражение в тело эмбриона и заражение в головной мозг.
Используются 7-12-дневные эмбрионы, заражение проводят
введением материала в различные участки тела или непосредственно
в головной мозг. Для заражения вскрывают пугу и подтягивают
пинцетом эмбрион. При этих методах заражения может быть гибель
эмбрионов от травмы до 30 % и более от числа зараженных.

6) Заражение в крупные кровеносные сосуды
хорионаллантоисной оболочки.
Этот метод заражения, как и
предыдущий, применяется очень редко. Материал вводят тонкой
иглой после удаления скорлупы по ходу кровеносного сосуда
непосредственно в сосуд по току крови.

После заражения куриные эмбрионы обязательно метят простым карандашом и ставят в термостат. За ними ежедневно наблюдают путем просмотра, наблюдение ведут до 7-8 дней в зависимости от вида вируса. В случае гибели эмбрионов их срочно удаляют из термостата и ставят в холодильник до момента вскрытия. Если эмбрион погиб в течение первых 14-18 часов, это может быть от травмы или токсичности патматериала. Поэтому, так же как и при заражении лабораторных животных, в сомнительных случаях рекомендуется, делать несколько пассажей и в опыт брать на каждый материал по несколько эмбрионов.

 

Вскрытие погибших зараженных куриных эмбрионов, или изъятых по истечении срока наблюдения производится со всеми правилами асептики в стерильных условиях бокса. При вскрытии скорлупу обрабатывают спиртом и обжигают, затем срезают пугу. У вскрытого эмбриона сначала тщательно отсасывают аллантоисную жидкость (количество ее около 7 мл), затем пинцетом оттягивают амниотическую оболочку, прокалывают пастеровской пипеткой и отсасывают амниотическую жидкость (количество ее 1,0-1,5 мл), затем собирают желток, извлекают оболочки и сам эмбрион. Жидкость, оболочки и сам эмбрион тщательно осматривают на наличие изменений. Амниотическая жидкость в норме совершенно прозрачная, при заражении она может быть мутная, кровянистая. Характерные изменения, вызванные вирусом, бывают наиболее выраженными на хорионаллантоисной оболочке: появляютсявоспалительные очаги, непрозрачные, круглой формы и кровоизлияния. Кровоизлияния могут быть на теле эмбриона. Весь материал собирают в стерильную посуду.

Куриные эмбрионы в вирусологии широко применяются не только для выделения вирусов, но и для накопления и получения антигенов, для приготовления живых и убитых вакцин, титрования вирусов, для постановки реакции нейтрализации вирусов, для аттенуирования (ослабления) вирусов, для изучения интерференции вирусов и получения интерферона.

 

 

 


Методы заражения куриных эмбрионов:

 

На ХАО В желточный мешок

 

 

 

1. В аллантоисную полость В амнион.

 

 

 

 

       
   
 

2. В аллантоисную полость В желточный мешок

 
 
 
 
 

 

 

 

I Крестьянская реформа 1861 г.

Император утвердил 19 февраля 1861 г. ряд законодательных актов по конкретным положениям крестьянской реформы. Были приняты центральное и местные положения, в которых регламентировались порядок и условия освобождения крестьян и передачи им земельных наделов. Их главными идеями были: крестьяне получают личную свободу и до заключения выкупной сделки с помещиком земля переходила в пользование крестьян.

Душевой надел состоял из усадьбы и пахотной земли, пастбищ и пустошей. Землей наделялись только лица мужского пола.

Крестьяне получали право заниматься торговлей, открывать предприятия, вступать в гильдии, обращаться в суд на равных основаниях с представителями других сословий, поступать службу, отлучаться с места жительства.

В 1863 и 1866 гг. положения реформы были распространены на удельных и государственных крестьян.

Крестьяне платили выкуп за усадебную и полевую землю. В основу выкупной суммы была положена не фактическая стоимость земли, а сумма оброка, которую помещик получал до реформы.

Крестьяне выплачивали двадцать пять процентов выкупной суммы наличными при совершении выкупной сделки, остальную сумму помещики получали из казны (деньгами и ценным бумагами), ее крестьяне должны были вместе с процентами выплачивать в течение сорока девяти лет. Полицейский фискальный аппарат правительства должен был обеспечить своевременность этих выплат. Для кредитования реформы образованы Крестьянский и Дворянский банки.

Волостной сход решал квалифицированным большинством вопросы: о замене общинного землепользования участковым, о разделе земли на постоянно наследуемые участки, о переделах, об удалении из общины ее членов.

Староста являлся фактическим помощником помещика (в период временнообязанного существования), мог налагать на виновных штрафы или подвергать их аресту.

Волостной суд избирался на год и решал незначительные имущественные споры или рассматривал за незначительные проступки.

Был предусмотрен широкий набор мер, применяемых к недоимщикам: отобрание доходов с недвижимости, отдача в работу или в опеку, принудительная продажа движимого и недвижимого имущества должника, отобрание части или всего надела.

Неблагоприятными последствиями реформы стали следующие: а) наделы крестьян уменьшились по сравнению с дореформенными, а платежи, в сравнении со старым оброком возросли; в) община фактически потеряла свои права на пользование лесами, лугами и водоемами; в) крестьяне оставались обособленным сословием.

1 января 1864 г. было утверждено " Положение о губернских и уездных земских учреждениях " . На них возлагалось: заведывание капиталами, имуществами и деньгами земства, содержание земских зданий и путей сообщения, меры по обеспечению "народного продовольствия", мероприятия по благотворительности, взаимное земское страхование имуществ, попечение о развитии местной торговли и промышленности, санитарные меры, участие в хозяйственных отношениях в области здравоохранения и образования.

Законом предусматривалось создание трех избирательных курий:

1. курии уездных землевладельцев, для участия в которой требовался высокий имущественный ценз и состоявшей преимущественно из дворян ? помещиков. Уездные землевладельцы с меньшим цензом участвовали в выборах через уполномоченных;

2. городской курии , участники которой должны были располагать купеческим свидетельством либо предприятием в определенном размере;

3. сельской курии , в которой не был установлен имущественный ценз, но была введена система трехступенчатых выборов: крестьяне, собравшиеся на волостной сход, посылали своих выборщиков на собрание, которое избирало земских гласных.

Земское собрание и земская управа (исполнительный орган, состоящий из председателя и двух членов) избирались на три года. Губернское земское собрание избиралось членами уездных собраний.Председатель уездной управы утверждался в должности губернатором, председатель губернской управы — министром внутренних дел. Нужно отметить, что земская реформа не сформировала стройной и централизованной системы. В ходе ее реализации не было создано органа, возглавляющего и координирующего работу всех земств. Когда в 1865 г. Санкт-Петербургское губернское земское собрание поставило вопрос об образовании такого органа, оно было попросту закрыто правительством. Существование земских учреждений допускалось только на губернском и уездном уровнях.

16 июля 1870 г. было утверждено " Городовое положение " , закреплявшее систему органов городского общественного управления: городское избирательное собрание и городскую думу городской управой — исполнительным органом).

Думу и управу возглавляло одно лицо — городской голова, утверждаемый в своей должности губернатором или министром внутренних дел.

Дума и управа избирались на четыре года, половина состава управы должна была обновляться через каждые два. Городской голова мог приостановить решение управы. Разногласия думы и управы решал губернатор.

Устанавливалось предельное число лиц нехристианского вероисповедания, допускавшееся в состав управы — оно не могло превышать одной трети. Городским головой не могло быть лицо еврейской национальности.

Доверь свою работу кандидату наук!
1500+ квалифицированных специалистов готовы вам помочь



Дата добавления: 2014-12-15; просмотров: 13 | Нарушение авторских прав




lektsii.net - Лекции.Нет - 2014-2022 год. (0.039 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав