Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

I Крестьянская реформа 1861 г.

Чаще всего в вирусологии в качестве биомоделей используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов, цыплят. Иногда используют также золотистых хомячков, утят и других животных. Условия использования лабораторных животных в качестве биомодели: Животные должны быть здоровы, получены из благополучного в отношении заразных болезней питомника, чувствительны к конкретному вирусу, стандартны (то есть одинаковы по полу, физиологическому состоянию, весу). Выбор лабораторных животных зависит от вида вируса.

Иногда при первом заражении у лабораторного животного не проявляются клинические признаки и патологоанатомические изменения, оно не погибает и остаётся здоровым. Тогда приходится проводить 3-5 «слепых», бессимптомных пассажей (перезаражений), прежде чем удастся адаптировать вирус к лабораторным условиям. Однако к некоторым вирусам лабораторные животные в принципе не чувствительны, в этом случае приходится использовать естественно восприимчивых животных, как, например, при чуме свиней и инфекционной анемии лошадей.

Цель заражения лабораторных животных:

1. Изучение патогенеза болезни;

2. Выделение вируса из пат.материала;

3. Наработка иммунных и гипериммунных сывороток;

4. Наработка вакцин;

5. Поддержание вирусов в условиях лаборатории;

6. Титрация, с целью определения количества вируса в единице объема;

7. Лаб. Животные - биологическая модель для постановки реакции нейтрализации;

Различают много способов введения вируссодержащего материала в организм животных:

- Подкожный; - Интрацеребральный;

- Внутрикожный; - Интраперитониальный;

- Внутримышечный; - Интраокулярный;

- Внутривеннвй; - Интранозальный;

- Алиментарный;

Выбор метода заражения лабораторных животных зависит от тропизма вируса. Так, при культивировании нейротропных вирусов животных заражают интрацеребрально (в головной мозг); респираторных - интраназально, интратрахеально; дерматропных – подкожно и внутрикожно.Заражение производят с соблюдением правил асептики и антисептики.

После заражения животных метят, помещают в изолированный бокс и ведут наблюдение в течение 10 суток. Гибель животного в первые сутки после заражения считается неспецифичной и в дальнейшем не учитывается. 3 признака указывают на результативность заражения: наличие клинических признаковгибель животного; патологоанатомические изменения в их органах и тканях.

2. Выделение вирусов на куриных эмбрионах

Куриный эмбрион - это оплодотворенное куриное яйцо, в котором развивается зародыш (эмбрион). Культивирование вирусов на куриных и перепелиных эмбрионах в последнее время получило широкое распространение как один из наиболее простых и надежных методов культивирования и диагностики многих вирусов и некоторых бактерий - бруцеллы, риккетсии, вибрионы.

Многие вирусы человека и животных способны культивироваться в развивающихся куриных эмбрионах. Эмбриональная ткань, особенно оболочки эмбриона, богатые тканями зародышевого эпителия, является благоприятной средой для размножения многих вирусов. Вирусы, имеющие эпителиотропные свойства (оспа, ИЛТ и др.), успешно развиваются на хорионаллантоисной мембране, вызывая макроскопически видимые изменения. Различные представители миксовирусов (грипп, болезнь Ньюкасла, чума плотоядных и др.), вирусы инфекционного бронхита, гепатита утят, арбовирусы и др. хорошо размножаются в эмбрионе при введении материала в аллантоисную полость. Некоторые вирусы успешно культивируются в желточном мешке.

Преимущества использования куриных эмбрионов:

1.Экономически выгодно, кроме того яйца легко доступны;

2.У развивающихся куриных эмбрионов отсутствуют защитные механизмы, т.к. система иммунитета еще не развита;

3.Скорлупа яиц препятствует проникновению через неё бактерий и вирусов из окружающей среды;

4.Для культивирования и выделения вирусов на куриных эмбрионах требуется очень несложное оборудование - обычный термостат или инкубатор.

Условия использования КЭ в вирусологии:

1.Яйца получают из хозяйств заведомо благополучных по инфекционным заболеваниям;

2.Куриные эмбрионы лучше получать от белых пород кур (леггорн, русская белая), т. к. они более устойчивы к манипуляциям и не гибнут от маленьких травм. Кроме того, у них скорлупа белая и более прозрачная, чем у других пород, и легче просвечивается, что удобно для просмотра и наблюдения в процессе работы с ними;

3. Для инкубирования отбирают оплодотворенные яйца снесенные не более 10 суток тому назад;

4. Берут незагрязненные яйца, т. к. мыть их перед инкубированием нельзя, а грязные яйца хуже просвечиваются при просмотре (овоскопии) и при работе с ними можно инфицировать эмбрион в процессе манипулирования;

Инкубируют яйца в инкубаторе или в термостате с водяным нагревом и доступом воздуха, причем в процессе инкубации в термостате яйца 2-3 раза в сутки нужно переворачивать и для лучшего газообмена вынимать на 5-10 минут на воздух. Для поддержания определенной влажности в термостат ставят сосуд с водой для испарения, температура в термостате должна быть 38°.

Развитие зародыша происходит уже в первые сутки инкубирования, происходит закладка головного мозга, скелета. Строение куриного эмбриона в возрасте 7-9 дней (см. тетрадь).

Для заражения наиболее часто используют эмбрионы 7-12 суточного возраста. Работу с куриными эмбрионами проводят в стерильной комнате-боксе со строжайшим соблюдением асептики.

Цель заражения куриных эмбрионов:

1. Выделить вырус из патматериала;

2. Наработка вакцин;

3. Поддержание вируса в условиях лаборатории;

4. Титрация вирусов;

5. Биологическая модель для постановки реакции нейтрализации;

6. Изучение интерференции вирусов и наработка интерферона;

Заражение куриных эмбрионов:

Для заражения нужно отбирать жизнеспособные эмбрионы с хорошо выраженной подвижностью. Перед заражением все эмбрионы тщательно просматривают в затемненной комнате на овоскопе

Во время просвечивания эмбрионов перед заражением на скорлупе простым карандашом обрисовывают пугу (воздушную полость), ход крупных кровеносных сосудов и место предлежания эмбриона, т. е. участок на скорлупе, где ближе всего к ней лежит эмбрион. Отметка пуги, места предлежания эмбрирна и хода крупных кровеносных сосудов затем служат ориентиром при выборе места введения вируссодержащего материала в момент заражения.

Отобранные для заражения куриные эмбрионы переносят в бокс, где и проводят с ними работу. Перед заражением скорлупу по месту введения материала дважды обрабатывают йодированным спиртом и обжигают. Доза заражения составляет 0,1-0,2 см^з.

В зависимости от вида вируса и цели заражения имеются различные методы введения вируссодержащего материала:

1) Заражение на хорионаллантоисную обалрчку, используют эмбрионы 7—12-суточного возраста при выделении и культивировании нейротропных, дерматропных н некоторых пантропных вирусов (оспа, энцефаломиелит, ИЛТ, ящур, бешенство, чума и др.). Существует 3 варианта заражения:

а)вскрывают пугу и срезают ее ножницами, отделяют
подскорлупную оболочку и наносят на хорионаллантоисную
оболочку (ХАО) материал. Отверстие в яйце затем закрывают
стерильным стеклянным колпачком и края колпачка
парафинируют;

б) выпиливают надфилем (напильничек) или зазубренным скаль­-
пелем в скорлупе треугольник с длиной сторон около 1 см на
границе пуги со стороны предлежания эмбриона, пинцетом
удаляют участок скорлупы и подскордупной оболочки и вводят
материал. Отверстие закрывают покровным стерильным
стеклом и края парафинируют, или заклеивают стерильным
лейкопластырем.

в)скальпелем удаляют небольшой участок скорлупы площадью
около 0,5 см по месту предлежания эмбриона, затем пинцетом
или иглой удаляют в этом участке подскорлупную оболочку и
вводят материал. Если материал плохо входит в полость яйца, можно с помощью резиновой груши через отверстие в скорлупе на пуге откачать воздух из пуги и в результате по месту введения материала образуется искусственная пуга и тогда материал легко вводится. Отверстие в скорлупе закрывают лейкопластырем или парафинируют.

2) Заражение в аллантоисную полость. Этот метод заражения
очень прост и применяется для выделения многих вирусов. Для
заражения берут 10-11-дневные эмбрионы. Имеется два варианта
заражения:

а) заражение проводят через пугу, не срезая ее. Иглой отмеряют
расстояние от верхушки пуги до границы пуги, отмеченной
карандашом на скорлупе, и вводят иглу на отмеченную глубину
и углубляют еще на 0,5 см, чтобы проколоть
хорионаллантоисную оболочку;

б) вводят материал иглой через прокол в скорлупе в месте
предлежания эмбриона на глубину 3-5 мм в бессосудистом
участке. Отверстие в скорлупе закрывают лейкопластырем или парафинируют.
3) Заражение в желточный мешок.

Для заражения используют 5-8-суточные эмбрионы.

Существует два варианта заражения:

а) иглу вводят со стороны пуги в желточный мешок под углом 45^о

к месту предлежания эмбриона под контролем овоскопа;

б) яйцо кладут на подставку также местом предлежания
эмбриона вниз и иглу вводят сверху вниз по направлению к
эмбриону на глубину около 1 см.

Место введения заклеивают лейкопластырем и парафинируют.

4) Заражение в амниотическую полость.

При этом методе заражения вирус может проникнуть

в различные клетки,находящиеся в контакте с амниотической

жидкостью, и размножаться в них. для удобства заражения

рекомендуется за 2-3 дня до проведения заражения эмбрионы

инкубировать пугой вверх. Тогда эмбрион и амнион смещаются вверх

и удобнее заражать. Имеется два варианта заражения:

а) вскрывают и срезают пугу, пинцетом удаляют подскорлупную
оболочку и захватывают амниона подтягивают амнион
пинцетом и вводят в амниотическую полость материал в дозе
0,1 мл. Отверстие в скорлупе затем закрывают стерильным
стеклянным колпачком и края парафинируют;

б) заражение с помощью длинной иглы через пугу в темной
комнате под контролем глаза, У иглы предварительно острие
загибают под прямым углом, чтобы получилась маленькая
площадка. Иглу вводят под контролем глаза через пугу до эмбриона,

под давлением затупленной иглы эмбрион в этом случае будет

смещаться, затем легким толчком прокалывают амнион и иглу

слегка оттягивают назад. При этом эмбрион должен смещаться за иглой вверх.

Затем вводят материал.

5) Заражение в тело эмбриона и заражение в головной мозг.
Используются 7-12-дневные эмбрионы, заражение проводят
введением материала в различные участки тела или непосредственно
в головной мозг. Для заражения вскрывают пугу и подтягивают
пинцетом эмбрион. При этих методах заражения может быть гибель
эмбрионов от травмы до 30 % и более от числа зараженных.

6) Заражение в крупные кровеносные сосуды
хорионаллантоисной оболочки. Этот метод заражения, как и
предыдущий, применяется очень редко. Материал вводят тонкой
иглой после удаления скорлупы по ходу кровеносного сосуда
непосредственно в сосуд по току крови.

После заражения куриные эмбрионы обязательно метят простым карандашом и ставят в термостат. За ними ежедневно наблюдают путем просмотра, наблюдение ведут до 7-8 дней в зависимости от вида вируса. В случае гибели эмбрионов их срочно удаляют из термостата и ставят в холодильник до момента вскрытия. Если эмбрион погиб в течение первых 14-18 часов, это может быть от травмы или токсичности патматериала. Поэтому, так же как и при заражении лабораторных животных, в сомнительных случаях рекомендуется, делать несколько пассажей и в опыт брать на каждый материал по несколько эмбрионов.

Вскрытие погибших зараженных куриных эмбрионов, или изъятых по истечении срока наблюдения производится со всеми правилами асептики в стерильных условиях бокса. При вскрытии скорлупу обрабатывают спиртом и обжигают, затем срезают пугу. У вскрытого эмбриона сначала тщательно отсасывают аллантоисную жидкость (количество ее около 7 мл), затем пинцетом оттягивают амниотическую оболочку, прокалывают пастеровской пипеткой и отсасывают амниотическую жидкость (количество ее 1,0-1,5 мл), затем собирают желток, извлекают оболочки и сам эмбрион. Жидкость, оболочки и сам эмбрион тщательно осматривают на наличие изменений. Амниотическая жидкость в норме совершенно прозрачная, при заражении она может быть мутная, кровянистая. Характерные изменения, вызванные вирусом, бывают наиболее выраженными на хорионаллантоисной оболочке: появляютсявоспалительные очаги, непрозрачные, круглой формы и кровоизлияния. Кровоизлияния могут быть на теле эмбриона. Весь материал собирают в стерильную посуду.

Куриные эмбрионы в вирусологии широко применяются не только для выделения вирусов, но и для накопления и получения антигенов, для приготовления живых и убитых вакцин, титрования вирусов, для постановки реакции нейтрализации вирусов, для аттенуирования (ослабления) вирусов, для изучения интерференции вирусов и получения интерферона.

Методы заражения куриных эмбрионов:

На ХАО В желточный мешок

1. В аллантоисную полость В амнион.

I Крестьянская реформа 1861 г.

Император утвердил 19 февраля 1861 г. ряд законодательных актов по конкретным положениям крестьянской реформы. Были приняты центральное и местные положения, в которых регламентировались порядок и условия освобождения крестьян и передачи им земельных наделов. Их главными идеями были: крестьяне получают личную свободу и до заключения выкупной сделки с помещиком земля переходила в пользование крестьян.

Душевой надел состоял из усадьбы и пахотной земли, пастбищ и пустошей. Землей наделялись только лица мужского пола.

Крестьяне получали право заниматься торговлей, открывать предприятия, вступать в гильдии, обращаться в суд на равных основаниях с представителями других сословий, поступать службу, отлучаться с места жительства.

В 1863 и 1866 гг. положения реформы были распространены на удельных и государственных крестьян.

Крестьяне платили выкуп за усадебную и полевую землю. В основу выкупной суммы была положена не фактическая стоимость земли, а сумма оброка, которую помещик получал до реформы.

Крестьяне выплачивали двадцать пять процентов выкупной суммы наличными при совершении выкупной сделки, остальную сумму помещики получали из казны (деньгами и ценным бумагами), ее крестьяне должны были вместе с процентами выплачивать в течение сорока девяти лет. Полицейский фискальный аппарат правительства должен был обеспечить своевременность этих выплат. Для кредитования реформы образованы Крестьянский и Дворянский банки.

Волостной сход решал квалифицированным большинством вопросы: о замене общинного землепользования участковым, о разделе земли на постоянно наследуемые участки, о переделах, об удалении из общины ее членов.

Староста являлся фактическим помощником помещика (в период временнообязанного существования), мог налагать на виновных штрафы или подвергать их аресту.

Волостной суд избирался на год и решал незначительные имущественные споры или рассматривал за незначительные проступки.

Был предусмотрен широкий набор мер, применяемых к недоимщикам: отобрание доходов с недвижимости, отдача в работу или в опеку, принудительная продажа движимого и недвижимого имущества должника, отобрание части или всего надела.

Неблагоприятными последствиями реформы стали следующие: а) наделы крестьян уменьшились по сравнению с дореформенными, а платежи, в сравнении со старым оброком возросли; в) община фактически потеряла свои права на пользование лесами, лугами и водоемами; в) крестьяне оставались обособленным сословием.

1 января 1864 г. было утверждено " Положение о губернских и уездных земских учреждениях ". На них возлагалось: заведывание капиталами, имуществами и деньгами земства, содержание земских зданий и путей сообщения, меры по обеспечению "народного продовольствия", мероприятия по благотворительности, взаимное земское страхование имуществ, попечение о развитии местной торговли и промышленности, санитарные меры, участие в хозяйственных отношениях в области здравоохранения и образования.

Законом предусматривалось создание трех избирательных курий:

1. курии уездных землевладельцев, для участия в которой требовался высокий имущественный ценз и состоявшей преимущественно из дворян? помещиков. Уездные землевладельцы с меньшим цензом участвовали в выборах через уполномоченных;

2. городской курии, участники которой должны были располагать купеческим свидетельством либо предприятием в определенном размере;

3. сельской курии, в которой не был установлен имущественный ценз, но была введена система трехступенчатых выборов: крестьяне, собравшиеся на волостной сход, посылали своих выборщиков на собрание, которое избирало земских гласных.

Земское собрание и земская управа (исполнительный орган, состоящий из председателя и двух членов) избирались на три года. Губернское земское собрание избиралось членами уездных собраний. Председатель уездной управы утверждался в должности губернатором, председатель губернской управы — министром внутренних дел. Нужно отметить, что земская реформа не сформировала стройной и централизованной системы. В ходе ее реализации не было создано органа, возглавляющего и координирующего работу всех земств. Когда в 1865 г. Санкт-Петербургское губернское земское собрание поставило вопрос об образовании такого органа, оно было попросту закрыто правительством. Существование земских учреждений допускалось только на губернском и уездном уровнях.

16 июля 1870 г. было утверждено " Городовое положение ", закреплявшее систему органов городского общественного управления: городское избирательное собрание и городскую думу (с городской управой — исполнительным органом).

Думу и управу возглавляло одно лицо — городской голова, утверждаемый в своей должности губернатором или министром внутренних дел.

Дума и управа избирались на четыре года, половина состава управы должна была обновляться через каждые два. Городской голова мог приостановить решение управы. Разногласия думы и управы решал губернатор.

Устанавливалось предельное число лиц нехристианского вероисповедания, допускавшееся в состав управы — оно не могло превышать одной трети. Городским головой не могло быть лицо еврейской национальности.