Читайте также:
|
| 1. МАЗКИ ИЗ РОТОГЛОТКИ | ||||
| 1.1. Сбор материала | Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают. | |||
| 1.2. Предобработка проб | Не требуется. | |||
| 1.3. Метод исследования | ОТ-ПЦР | |||
| 1.4. Условия хранения материала | При температуре от 2 до 8°С – в течение трех суток. При температуре минус 70°С или в жидком азоте – длительно. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. Температура хранения минус 200С не допускается. | |||
| 1.5. Условия транспортирования материала | В специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом: - при температуре 0-4 0С – не более трех суток; - при температуре минус 700С или в жидком азоте – длительно. Температура транспортировки минус 200С допускается только с учетом однократного замораживания и транспортировки без размораживания не более 4 дней. | |||
| 2. Мазки из полости носа | ||||
| 2.2. Сбор материала | Мазки (слизь) берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. Зонд с ватным тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Для метода иммунофлюоресценции забор материала для этого метода исследования производят перед другими манипуляциями. После взятия материала тампон помещают в пробирку с 2-3 мл 0,1 моль/л фосфатно-солевого буферного раствора. Для получения суспензии клеток тампоны в пробирке тщательно отжимают о стенки пробирки. Тампон удаляют. Пробирку закрывают. Для ПЦР-анализа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают. | |||
| 2.3. Предобработка проб | Для метода иммунофлюоресценцииклетки осаждают центрифугированием в течение 5-6 мин при 3000 об/мин. Надосадачную жидкость осторожно удаляют, а клеточный осадок ресуспендируют в нескольких каплях ФСБ и наносят на предметные стекла (не менее 3 шт.) раздельными каплями. Препарат высушивают и фиксируют 10 мин в охлажденном до 2-80 С химически чистом ацетоне. Для ПЦР-анализа - не требуется. | |||
| 2.4. Метод исследования | МФА, ОТ-ПЦР | |||
| 2.5 Условия хранения материала | Для метода иммунофлюоресценциификсированные неокрашенные мазки можно хранить при температуре от 2 до 8°С в течение 6-7 дней, при температуре минус 20°С – до 6 мес. Для ПЦР-анализа - см. п.п. 1.4. | |||
| 2.6. Условия транспортирования материала | Для метода иммунофлюоресценциив термоконтейнере с охлаждающими элементами при температуре от 0 до 4 °С. Для ПЦР-анализа -см. п.п. 1.5. | |||
| 3. Смывы из полости носа | ||||
| 3.1.Сбор материала | Сбор материала производят в положении больного сидя с отклоненной назад головой. Для получения смыва из полости носа в оба носовых хода поочередно с помощью одноразового шприца вводят по 3-5 мл теплого стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида. Промывную жидкость из обоих носовых ходов собирают через воронку в одну стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием. | |||
| 3.2. Предобработка проб | Не требуется. | |||
| 3.3. Метод исследования | ОТ-ПЦР | |||
| 3.4. Условия хранения материала | См. п.1.4. | |||
| 3.5. Условия транспортирования материала | См.п.1.5. | |||
| 4. Смывы из ротоглотки | ||||
| 4.1. Сбор материала | Перед сбором материала необходимо предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10-15 сек) 8-10 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через воронку в стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием. | |||
| 4.2. Предобработка проб | Не требуется. | |||
| 4.3. Метод исследования | ОТ-ПЦР | |||
| 4.4. Условия хранения материала | См. п.1.4. | |||
| 4.5. Условия транспортирова-ния материала | См.п.1.5. | |||
| 5. НОСОГЛОТОЧНОЕ ОТДЕЛЯЕМОЕ | ||||
| 5.1. Сбор материала | Производится натощак после взятия мазков из полости носа. Осуществляется двумя способами: 1. Больной в три приема прополаскивает горло 10-15 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Смыв собирают в одноразовые полипропиленовые флаконы с завинчивающимися крышками объемом 50 мл. Ватными тампонами, зажатыми пинцетом, протирают заднюю стенку глотки и носовые ходы. Ватные тампоны опускают во флакон со смывом. 2. Сухим или слегка увлажненным 0,9 % раствором натрия хлорида тампоном, который удерживают с помощью пинцета, протирают заднюю стенку глотки и опускают его в пробирку с 5 мл стабилизирующей среды (приложение 3). Процедуру повторяют 2-3 раза. Все тампоны от одного больного собирают в одну пробирку. После взятия материала с задней стенки глотки тщательно протирают носовые ходы небольшими ватными тампонами и опускают их в ту же пробирку. Пробирку закрывают. | |||
| 5.1. Предобработка проб | Тампоны прополаскивают в стабилизирующей среде, в которой они содержались, отжимают о стенку сосуда и удаляют. Смыв отстаивают в холодильнике 40-60 мин. Центрифугирование и фильтрацию не проводят. Для выделения вируса используют среднюю часть отстоя, которую небольшими порциями переносят в 3 стерильные пробирки. Одну используют для выделения вируса, остальные замораживают при температуре мунус 70 0С или в жидком азоте. | |||
| 5.3. Метод исследования | Выделение вируса | |||
| 5.4. Условия хранения материала | При температуре от 2 до 8 °С – не более 3 дней. При температуре минус 70°С или в жидком азоте – длительно. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. Температура хранения минус 200С не допускается. | |||
| 5.5. Условия транспортирования материала | См. п.п. 1.5. | |||
| 6. Фекалии | ||||
| 6.1.Сбор материала | Используют пробы фекалий массой (объемом) 1-3 г (1-3 мл). Исследование мазков неинформативно из-за низкого содержания в них возбудителей. Фекалии забирают из предварительно продезинфицированного горшка или подкладного судна. Пробу в количестве 1 грамма (примерно) отдельным наконечником с аэрозольным барьером или одноразовыми лопатками переносят в специальный стерильный флакон. | |||
| 6.2. Предобработка проб | При исследовании нативных фекалий без предшествующего замораживания готовят фекальную суспензию (при водянистой консистенции фекалий в виде прозрачной жидкости фекальную суспензию не готовят). Приготовление фекальной суспензии: В соответствующее пробам количество микроцентрифужных пробирок (объемом 1,5 мл) вносят 0,8 мл фосфатного буфера (стерильного изотонического раствора натрия хлорида). В каждую пробирку отдельным наконечником с аэрозольным барьером (или одноразовыми лопатками) вносят 0,1 г (0,1 мл) фекалий и тщательно ресуспендируют на вортексе до образования гомогенной суспензии. При невозможности исследования материала в течение суток и/или необходимости длительного хранения к 10-20%-й суспензии фекалий в фосфатном буфере (или стерильном изотоническом растворе натрия хлорида) добавляют глицерин в конечной концентрации 10-15%. Подготовленные таким образом пробы замораживают только после тщательной гомогенизации и экспозиции с глицерином в течение 30-40 минут. Приготовление осветленного экстракта фекалий: Для приготовления осветленного экстракта фекалий используют фекалии водянистой консистенции, свежеприготовленную суспензию фекалий или суспензию, подвергавшуюся замораживанию с глицерином. Взвесь фекалий интенсивно гомогенизируют на вортексе. Осветляют полученную суспензию путем центрифугирования при 10 тыс. g (12 тыс об./мин. на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия) в течение 5 минут. Супернатант (0,1 мл) смешивают с отрицательным контрольным образцом (ОКО) (0,1 мл) в соотношении 1:1 и используют непосредственно для выделения РНК. При необходимости хранения супернатант отбирают в отдельную одноразовую пробирку. | |||
| 6.3. Метод исследования | ОТ-ПЦР | |||
| 6.4. Условия хранения материала | См.п.1.4. | |||
| 6.5. Условия транспортирования материала | См. п.1.5. | |||
| 6. СЕКЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ | ||||
| 7.1.Сбор материала | В качестве секционного материала используются ткани легких, трахеи, сегментарных бронхов, селезенки. Секционный материал собирают в одноразовые полипропиленовые флаконы с завинчивающимися крышками объемом 50 мл. | |||
| 7.2. Предобработка проб | Кусочки органов гомогенизируют в стерильных фарфоровых ступках и готовят 10 % суспензию на стерильном 0,9 % растворе натрия хлорида или фосфатном буфере. Суспензию переносят в микропробирку на 1,5 мл и центрифугируют при 10000 оборотах в течение 30 секунд. Супернатант используют для выделения РНК. | |||
| 7.3. Метод исследования | ОТ-ПЦР | |||
| 7.4. Условия хранения материала | См.п.1.4. | |||
| 7.5. Условия транспортирования материала | См. п.1.5. | |||
Приложение 3 (обязательное)
Перечень вирусологических лабораторий и лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора, проводящих первичный скрининг на ВГПА
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в г. Санкт-Петербурге |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Карелия |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Коми |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Архангельской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Вологодской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Калининградской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ленинградской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Мурманской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Новгородской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Псковской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Воронежской области |
| ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Белгородской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Брянской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Владимирской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ивановской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Калужской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Костромской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Курской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Липецкой области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Московской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Орловской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Рязанской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Смоленской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Тверской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Тульской области |
| ФГУЗ «Противочумный центр Роспотребнадзора» |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ярославской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Нижегородской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Самарской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Башкортостан |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Марий-Эл |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Мордовия |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Татарстан |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Удмуртия |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Чувашской Республике |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Кировской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Оренбургской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Пензенской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Пермском крае |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Саратовской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ульяновской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ставропольском крае |
| Ставропольский противочумный НИИ |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ростовской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Краснодарском крае |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Калмыкия |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Кабардино-Балкарской Республике |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Дагестан |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Северная Осетия |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Астраханской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Волгоградской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Адыгея |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Карачаево-Черкесской Республике |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Свердловской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Курганской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Тюменской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Челябинской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Омской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Красноярском крае |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Алтайском крае |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Бурятия |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Тыва |
| ФГУЗ «ЦгиЭ» в Республике Алтай |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Иркутской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Кемеровской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Новосибирской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Томской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Читинской области |
| Хабаровская противочумная станция |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Хабаровском крае |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Приморском крае |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Амурской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Магаданской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Саха (Якутия) |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Камчатской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Сахалинской области |
| ФГУЗ «ЦГиЭ» в Еврейской автономной области |
Приложение 4 (справочное)
Дата добавления: 2014-12-20; просмотров: 39 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |