Главная страница | Контакты | Случайная страница Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Методики определения Hb, подсчета эритроцитов, времени свертывания, времени кровотечения.

1. Определение Hb цианметгемоглобиновым методом: основан на окислении гемоглобина при действии красной кровяной соли в метгемоглобин, который с CN- ионами образует стабильный, окрашенный в красный цвет комплекс – цианметгемоглобин (CNMetHb). Концентрация его может быть измерена на спектрофотометре, гемоглобинометре.

Содержание гемоглобина в периферической крови в норме у мужчин составляет 132-164 г/л, у женщин – 115-145г/л. Снижение концентрации гемоглобина – основной лабораторный признак анемии любой этиологии. Повышается у людей, живущих в высокогорье.

2. Подсчёт эритроцитов: для подсчета эритроцитов в камере кровь разводят в 200 раз в 3,5% растворе хлорида натрия, для чего 0,02 мл крови вносят в предварительно отмеренные 4 мл разводящего раствора. Взвесь тщательно перемешивают и затем заполняют счетную камеру (стеклянную пластинку с нанесенными на нее одной или двумя счетными сетками). Каплю разведенной крови вносят пипеткой под притертое покровное стекло камеры. Жидкость по капиллярам засасывается и заполняет пространство над сеткой. Подсчет производят спустя 1 мин (когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40 и окуляром 7.

Существует много различных подсчетных сеток, но все они построены по одному принципу. Сетки состоят из больших и малых квадратов, площадь их равна 1/25 и 1/400 мм² соответственно. Наиболее часто применяется сетка Горяева. Она состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на малые, по 16 квадратов в каждом. Под­счет эритроцитов производят в 5 больших квадратах, разделенных на малые, придерживаясь определенной последовательности счета: передвигаются из квадрата в квадрат по горизонтали, один ряд слева направо, следующий — справа налево. Число эритроцитов в 5 больших квадратах пересчитывают на содержание их в 1 л. Нормальное число эритроцитов у женщин 3,4— 5,0* 10¹², у мужчин — 4,0—5,6- 10¹² в 1 л крови.

Число эритроцитов можно определять и с помощью приборов, упрощающих и автоматизирующих это исследование. К таковым относятся эритрогемометры и электрофотоколориметр (позволяют судить о числе эритроцитов путем измерения с помощью фотоэлемента количества света, поглощенного и рассеянного при его прохождении через взвесь эритроцитов) и приборы автоматического счета типа целоскопа (производят непосредственный отсчет эритроцитов). Принцип заключается в изменении клетками крови сопротивления электрической цепи при прохождении их через узкий капилляр. Это изменение регистрируется с помощью электромагнитного счетчика. Каждая клетка отражается на осциллоскопическом экране и регистрируется на шкале прибора.

3. Определение времени свёртывания: характеризует свертываемость крови в целом и не отражает отдельных фаз свертывания. Оно удлиняется при повышении антикоагулянтной активности крови или снижении концентрации прокоагулянтов, укорачивается при наклонности к тромбообразованию. Наибольшее замедление свертывания (до нескольких часов) наблюдается при гемофилии А.

Для определения свертывания взятую из вены кровь помещают в пробирке на водяную баню при температуре 37° С и каждые 30 с, наклоняя пробирку, смотрят, как смещается уровень жидкости. Прекращение смещения, т.е. свертывание крови, происходит в норме через 5—10 мин (способ Ли и Уайта). Широко применяются капельные способы определения свертываемости крови. Кровь либо набирают в капиллярную пипетку и определяют время, через которое кровь перестанет передвигаться в ней, либо помещают каплю крови во влажную подогреваемую камеру на парафинированное часовое стекло и определяют срок, когда капля при наклоне стекла перестает стекать к его краю.

4.Определение времени кровотечения: определяют по уколочной пробе по Дюке. Кончик пальца или мочку уха прокалывают скарификатором на глубину 3 мм. Самопроизольно выступающую кровь снимают каждые 30 с прикосновением бумаги. Нормальная продолжительность кровотечения 2-4 мин. Поскольку прекращение кровотечения связано с образованием белого (тромбоцитного) тромба, результаты пробы зависят от числа тромбоцитов и способности сосудистой стенки к сокращению, чему благоприятствует выделение тромбоцитами вазоконстриктора серотонина. При тромбоцитопении продолжительность кровотечения значительно удлиняется, число снятых капель возрастает во много раз. При нарушении тонуса капилляров размер капель становится больше.