Студопедия  
Главная страница | Контакты | Случайная страница

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Определение общего количества дрожжевых клеток

Читайте также:
  1. II. 4 Требования к итоговым достижениям освоения образовательной программы начального общего образования обучающимися с нарушениями речи.
  2. II. ПРАВИЛА ОБЩЕГО ПОРЯДКА
  3. IX. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОБЕДИТЕЛЕЙ И ПРИЗЕРОВ
  4. V Рождение всего потомства лейкозных клеток происходит из одной мутировавшей клетки.
  5. VI. Определение победителей и награждение
  6. Аномалии количества
  7. Аномалии количества и формы зубов.
  8. Асептика и антисептика. Стерилизация и дезинфекция. Определение понятий, методы, область применения.
  9. Атипизм лейкозных клеток
  10. В достижение целей основного общего образования

Общее количество засевных дрожжей определяют методом прямого подсчета их в счетных камерах.

Перед взятием пробы дрожжи в дозаторе тщательно перемешивают, отбирают среднюю пробу, а из нее 10 см3 среды. Пробу, не фильтруя, разводят в 10 раз водой и тщательно взбалтывают в течение 1 мин. Затем тонкой пипеткой отбирают небольшую каплю дрожжевой суспензии и наносят ее на среднюю пластину камеры.

Подсчет дрожжевых клеток производят немедленно после отбора пробы, иначе количество дрожжевых клеток не будет соответствовать истинному.

Хорошие засевные дрожжи должны содержать 120…160 млн клеток в 1 см3 дрожжевой суспензии.

Метод прямого подсчета клеток микроорганизмов в счетных камерах успешно применяют для определения общего количества микроорганизмов, содержащихся во взвесях (суспензиях). Метод имеет ограничения применения, связанные с тем, что в счетных камерах производится учет всех клеток микроорганизмов без диффереренциации на живые и мертвые клетки. Кроме того, счетные камеры могут быть использованы лишь для подсчета относительно крупных объектов – клеток водорослей, дрожжей, спор грибов, микроскопируемых при объективе 8…40 х.

Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло с нанесенными на нем поперечными прорезами, которые образуют три поперечно расположенные площадки. Средняя площадка продольным прорезом разделена пополам, причем на каждой половине нанесена квадратная сетка (рисунок 4.1а). Две боковые площадки расположены на 0,1 мм выше средней (рисунок 4.1б). Эти площадки служат для притирания покровного стекла.

 

а – вид сверху; б – вид сбоку;

в – вид при малом увеличении микроскопа

 

Рисунок 3.1 – Счетная камера Горяева

 

Сетка разделена на определенное количество больших и маленьких квадратов, по разному сгруппированных (рисунок 1в).

Постоянной величиной во всех сетках является маленький квадрат (АВСD), сторона которого равна 1/20 мм (0,05 мм), площадь его 1/400 мм2 (0,0025 мм2), а объем при высоте камеры 1/10 мм (0,1 мм) – 1/4000 мм3 (0,00025 мм3) или 1/4000000 мл. Так называемый большой квадрат АВСD состоит из 16 малых квадратиков.

Камера Горяева имеет площадь 9 мм2, объем камеры – 9 мм3 и разбит на 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом ряду).

Каплю взвеси наносят на сетку камеры и сверху накрывают чистым покровным стеклом. Жидкость под покровным стеклом должна быть равномерно без пузырьков распределена по всей сетке, не выступая в желобок между стенками. Большими пальцами покровное стекло плотно притирают к боковым площадкам камеры до появления ньютоновских колец.

Камеру с исследуемым материалом помещают на предметный столик микроскопа и микроскопируют с объективом 40 х (в поле зрения должны быть отчетливо видны как квадратики, так и клетки микроорганизмов).

Просчитывают количество клеток в пяти больших квадратах (т.е. в 80 малых), расположенных по диагонали. Учитываются все клетки, размешенные внутри квадрата и на пограничных линиях, если они большей частью лежат внутри квадрата. Клетки, разделенные пограничной линией пополам, считают только на двух из четырех границ квадрата, а клетки, лежащие большей своей половиной вне данного квадрата, совсем не учитывают.

 

Таблица 3.1 – Количественный учет микроорганизмов в камере Горяева

 

Разведение суспензии Повторность определения Количество клеток микроорганизмов в пяти больших квадратах счетной камеры Общее число клеток в 80 малых квадратах Среднее число клеток в 1 малом квадрате Количество клеток в 1 мл исходной суспензии
         
                   
                 
1:10                  
                 

 

Находят среднее количество клеток в одном квадратике. Допустим, в пяти больших квадратах (80 малых) – 240 клеток, тогда в одном малом квадратике среднее количество клеток 240:80 = 3 пересечет на 1 мл суспензии с учетом разведения производят по формуле

где N – число клеток в 1 мл суспензии;

a – среднее число клеток в малом квадрате;

h – глубина камеры, мм

S – площадь малого квадрата, мм2

К – разведнение исходной суспензии;

1000 – коэффициент пересчета мм3 в мл (1 мл = 1000 мм3).

Результаты работы оформляют в виде таблицы (таблица 4.1).

 




Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 88 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав

Органолептическая оценка зерна | Определение засоренности | Влажность зерна | Сахариметр универсальный СУ-3 | Пользование поляриметрическими кюветами | Порядок работы | Определение крахмалистости | Определение крахмалистости картофеля | Реактивы | Проведение анализа |


lektsii.net - Лекции.Нет - 2014-2024 год. (0.006 сек.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав