Читайте также:
|
Стерилизация - полное уничтожение микроорганизмов и их покоящихся форм (например, спор). Инструменты (скальпели, пинцеты, иглы и т.д.) стерилизуют в сушильном шкафу (при температуре 140◦С в течение 2 часов, при температуре 180◦С - 30 минут). Шприцы, ножницы, пробочные сверла удобнее кипятить(30 мин, с добавлением 1-2% р-ра бикарбоната натрия). Металлические предметы нельзя автоклавировать: под воздействием пара они ржавеют и тупятся. Непосредственно перед работой и в процессе её инструменты помещают в стакан со спиртом и обжигают в пламени спиртовки. Стерилизация материалов. Вату, марлю, ватные пробки, фильтровальную бумагу, халаты, косынки стерилизуют в автоклаве под давлением 2 атм. в течение 25-30 мин. Стерилизация жидких лекарств – м-д пастеризации, производится нагревание до температуры 50-65◦С в течении 5-6 минут с последующим быстрым охлаждением. Стерилизация паром при давлении 1атм. В течении 15-20 минут.
Развернутая реакция агглютинации
Сначала готовят основное разведение сыворотки, из которого делают серию разведений путем последовательного переноса 1 мл из предыдущей пробирки в следущую пробирку ряда. Из предыдущей пробирки 1 мл разведенной сыворотки удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку вносят 1 мл изотонического раствора хлорида натрия. Затем в каждую пробирку вносят пастеровской пипеткой по 2 капли взвеси бактерий. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 2 ч при температуре 37◦С, затем сутки выдедерживают при комнатной температуре. Учет реакции производят, оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном встряхивании. В контрольных пробирках агглютинации не должно быть. К.а – контроль антигена. К. с – контроль сыворотки.
+ + + + Полная агглютинация: очень большой осадок, полное просветление жидкости. Результат положительный
+ + + Неполная агглютинация: осадок такой же, надосадочная жидкость над осадком слегка мутновата. Результат положительный
+ + Слабая агглютинация: осадок небольшой, жидкость непрозрачная. Результат слабоположительный
+ Следы агглютинации: осадок маленький, надосадочная жидкость непрозрачная. Сомнительный результат реакции
- Отрицательная реакция: осадка нет, взвесь равномерно мутная.
Оценить результаты реакции связывания комплимента, дать заключение.
Для постановки РСК используют комплемент, к-й содержится в сыворотке крови морских свинок. Гемолитическая активность комплемента полностью утрачивается при прогревании сыворотки в течении 30 мин при 56◦С. При адсорбции комплемента на комплексе антиген-антитело его действие проявляется реакцией лизиса антигена, если антиген корпускулярный, или не сопровождается ни какими видимыми изменениями. Для учета РСК вводят вспомогательную гемолитическую систему. Она состоит из взвеси эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика, полученной путем его иммунизации упомянутыми эритроцитами. + РСК характеризуется задержкой гемолиза вследствие адсорбции комплемента системой антиген-антитело. – РСК хар-ся задержкой гемолиза, поскольку свободный комплемент связывается с гемолитической системой. РСК обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Оценку РСК проводят по четырехплюсовой системе:
+ + + + Полная задержка гемолиза, эритроциты в осадке, надосадочная жидкость про-зрачная; резко положительная РСК.
+ + + Неполная задержка гемолиза, эритроциты в осадке, надосадочная жидкость про-зрачная, слабо розового цвета; положительная РСК.
+ + Частичная задержка гемолиза, осадок эритроцитов незначительный, надосадочная жидкость красно-розового цвета, прозрачная; слабо положительная РСК.
+ Осадок незначительный, жидкость красная; сомнительная РСК.
- Полный гемолиз, прозрачная красная жидкость. Отрицательная РСК.
Дата добавления: 2014-12-20; просмотров: 197 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |