Читайте также:
|
ІНСТРУКЦІЯ
Дисципліна: «Мікробіологія з основами імунології та технікою мікробіологічних досліджень»
Тема: Виготовлення препаратів з патологічного матеріалу. Виготовлення нативних препаратів і їх мікроскопія
Спеціальність: «Лабораторна діагностика»
| Оснащення: | - світлові мікроскопи; - імерсійне масло; - лабораторний посуд (пробірки, піпетки, чашки Петрі); - предметні і покривні скельця; - стерильні тампони; - патологічний матеріал; - культури мікроорганізмів; - розчини барвників; - бактеріальні петлі; - спиртівка, сухий спирт, сірники, - маркер; - пісочні годинники; - лотки для фарбування; - фільтрувальний папір; - фізіологічний розчин; - дезінфекційний розчин; - вата, пінцет, шпателі; - гумові рукавички, мило, рушник. |
| Конкретні цілі: | |
| Знати: | Морфологію мікроорганізмів. Мікроскопічний метод діагностики інфекційних хвороб. Етапи виготовлення мазків-препаратів з патологічного матеріалу. Методи вивчення рухливості бактерій. |
| Вміти: | - Обладнати робоче місце для виготовлення мазків-препаратів. - Готувати мазки-препарати з патологічного матеріалу (харкотиння, гною, слизу із зіва, крові, зубного нальоту). - Готувати препарати «зависла» і «роздавлена» краплі. - Визначати рухливість бактерій. - Проводити мікроскопію препаратів. - Дотримуватися правил техніки безпеки, охорони праці в галузі, професійної безпеки, протиепідемічного режиму, чинних наказів МОЗ України під час роботи з патологічним матеріалом, культурами мікроорганізмів, обладнанням, тощо. |
| Практичні навички: | - Організація та обладнання робочого місця для виготовлення мазків-препаратів. - Виготовлення мазків-препаратів з патологічного матеріалу (харкотиння, гною, слизу із зіва, крові, зубного нальоту). - Визначення рухливості бактерій. - Дотримуватись правил техніки безпеки, охорони праці в галузі, професійної безпеки, протиепідемічного режиму, чинних наказів МОЗ України під час роботи з обладнанням, апаратурою, патогенним матеріалом, культурами мікроорганізмів тощо. |
Хід заняття:
Завдання №1. Під керівництвом викладача підготуйте робоче місце. Запишіть алгоритми виконання практичних навичок.
алгоритм «Виготовлення мазка з патологічного матеріалу
(харкотиння або гною):
Для виявлення мікроорганізмів у патологічному матеріалі готують мазки на предметному склі.
Виготовлені препарати використовують для мікроскопічного дослідження патологічного матеріалу після забарвлення за методом Ціля-Нільсена – для виявлення мікобактерій туберкульозу, лепри, а також деяких актиноміцетів.
Оснащення:
- досліджуваний матеріал;
- предметні скельця;
- спиртівка, сухий спирт, сірники;
- бактеріологічна петля;
- стерильні пастерівські піпетки;
- дезінфекційний розчин;
- олівець по склу (маркер);
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП 1. Надягніть гумові рукавички. 2. Протріть насухо 2 знежирених предметних скельця. 3. Поставте свій номер у верхньому лівому куті кожного скла. | |
| ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ 1. Нанесіть стерильною бактеріологічною петлею або пастерівською піпеткою патологічний матеріал (харкотиння або гній), що досліджується на середину знежиреного предметного скла. Використану піпетку опустіть у дезінфекційний розчин. 2. Накрийте його другим склом так, щоб залишилась вільною 1/3 частина кожного скла, злегка притисніть. 3. Розведіть стекла в різні сторони, взявши їх за вільні кінці І і ІІ пальцями обох рук, злегка притисніть. Таким чином отримаєте 2 однакових мазки. 4. Залиште мазки на столі для висихання. 5.Зафіксуйте мазок фізичним способом: тричі проведіть мазок над полум’ям спиртівки. Після фіксації скло, прикладене до тилу долоні, викликає почуття жару. | |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1.Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук. | Забезпечується інфекційна безпека. |
алгоритм «Виготовлення мазку-препарату зі слизу з зіва (носа)
Застосовується для прямої мікроскопії мазків з зіва (носа) при лабораторній діагностиці ангін та дифтерії.
Оснащення:
- бактеріологічні петлі;
- спиртівка, сухий спирт, сірники;
- маркер, пінцети, штативи;
- предметні стекла;
- дезінфекційний розчин;
- ізотонічний розчин натрію хлориду;
- ватні тампони для зіва і носа;
- шпателі, серветки;
- бланки направлень;
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | ОБГРУНТУВАННЯ |
| І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП 1.Надягніть гумові рукавички. 2.Обладнайте робоче місце. 3. Запишіть у щоденник умови забору матеріалу і доставки до лабораторії. 4. Підпишіть предметні стекла. Поставте позначку «З» і «Н». | Зібраний матеріал повинен бути доставлений до лабораторії не пізніше 1-2 годин після взяття. |
| ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ 1. Взяття патологічного матеріалу ватним тампоном із зіву і носу: - поставте в штатив 2 пробірки зі стерильними тампонами (поставте позначку «З» і «Н»; - запропонуйте пацієнту сісти проти джерела світла, відкинути голову назад і широко відкрити рот; - візьміть тампон «З» у праву руку, звільніть його від пробірки; - візьміть стерильний шпатель у ліву руку, притисніть ним корінь язика; - ведіть тампон у порожнину рота і візьміть слиз (гній) з пошкоджених ділянок мигдаликів (при дифтерії матеріал забирають на кордоні здорової і пошкодженої тканини), дужок піднебіння, язика і задньої стінки глотки; - виведіть тампон із зіва, не торкаючись язика, слизової оболонки, щік, зубів; - зробіть мазок на предметному склі; - тампон помістіть у дезінфекційний розчин (при дифтерії занурюють у середовище збагачення). - висушіть мазок на повітрі; - зафіксуйте у полум’ї спиртівки; - виготовлені мазки забарвлюють простим методом чи за Грамом; - зробіть огляд носових ходів; - візьміть тампон «Н» у праву руку, введіть тампон у носовий хід до кінця ходу; | Під час забору патологічного матеріалу дотримуйтесь правил асептики та техніки безпеки. Матеріал збирають обертальними рухами, злегка натискаючи на тампон. |
| ЕТАПИ | ОБГРУНТУВАННЯ |
| - зберіть слиз зі стінок одного носового ходу, потім другого; - на предметному склі зробіть мазок; - тампон помістіть у дезінфекційний розчин; - висушіть мазок на повітрі; - зафіксуйте у полум’ї спиртівки; - виготовлені мазки забарвлюють простим методом чи за Грамом. | Тампон вводять у порожнину носу і придавлюють до його дна, акуратно витягують. Для цього матеріал рівномірно розподіліть на поверхні скла. |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук. | Забезпечується інфекційна безпека. |
алгоритм «Виготовлення мазків-відбитків»
Роблять з органів тварин і людей, харчових продуктів щільної консистенції (сир, м'ясо, шинка, ковбаса, риба та ін.), а також з поверхні молодих колоній грибів, актиноміцетів, рідше – бактерій.
Оснащення:
- стерильний інструментарій (скальпель, ножиці, пінцет);
- досліджуваний матеріал;
- предметній скельця;
- олівець по склу;
- спиртівка, сухий спирт, сірники;
- дезінфекційний розчин;
- етанол, суміш Нікіфорова;
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| І. Підготовчий етап 1. Надягніть гумові рукавички. 2. Підпишіть предметне скельце зі зворотної сторони. 3. Виберіть ділянку органу (іншого матеріалу), з якого треба зробити мазок-відбиток. | |
| ІІ. виконання навички 1. Нагрітим у полум’ї спиртівки скальпелем припаліть поверхню органу або харчового продукту. Скальпель опустить у дезінфекційний розчин. 2. Стерильними ножицями виріжте шматочок з цієї ділянки тканини. Ножиці занурте у дезінфекційний розчин. 3. Візьміть пінцетом шматочок тканини і прикладіть поверхню зрізу до предметного скла у 2-4 місцях, отримуючи таким чином мазок-відбиток. Притискання до скла повинно бути строго вертикальним тривалістю 1-2 сек. 4. Висушіть мазок на повітрі. 5. Зафіксуйте мазки хімічним методом: на поверхню препарату нанесіть декілька крапель етанолу (10-15 хв.) або суміші Нікіфорова (10-15 хв.). | |
| ЕТАПИ | вказівки до виконання |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1.Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук. | Забезпечується інфекційна безпека. |
Алгоритм «Виготовлення мазка для мікроскопії з зубного нальоту»:
Мазки з зубного нальоту виготовляють для вивчення різних морфологічних форм мікроорганізмів.
Оснащення:
- спиртівка, сухий спирт;
- зубний наліт;
- дезінфекційний розчин;
- етанол, суміш Нікіфорова;
- маркер;
- стерильні скляні палички;
- предметні та покривні скельця;
- туш;
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | ОБҐРУНТУВАННЯ |
| І. Підготовчий етап 1. Надягніть гумові рукавички. 2. Підготуйте предметне скло і покривне скельце. 3. Поставте свій номер у верхньому лівому куті предметного скла. | |
| ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ 1. На знежирене предметне скло капніть краплю розведеної 1:10 туші. 2. За допомогою стерильної скляної палички перед дзеркалом візьміть зубний наліт біля ясен нижніх зубів. 3. Внесіть отриманий матеріал у краплю туші і ретельно розітріть його до отримання однорідної маси. 4. Скляну паличку опустіть у дезінфекційний розчин. 5.За допомогою покривного скла розподіліть матеріал вздовж предметного скла. 6. Висушіть препарат на повітрі. 7. Зафіксуйте хімічним способом (етанолом, сумішшю Нікіфорова) протягом 5 хвилин. 8. Проведіть мікроскопію виготовленого препарату у імерсійній системі мікроскопу. | |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1.Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук. | Забезпечується інфекційна безпека. |
Алгоритм «Виготовлення мазка із крові»:
Мазки із крові досліджують для виявлення в ній збудників інфекційних захворювань, що супроводжуються бактеріемією (менінгококовий сепсис, малярія, висипний тиф та ін.)
Оснащення:
- набір для взяття крові;
- предметні скельця;
- дезінфекційний розчин;
- скло зі шліфованим краєм;
- 96% етиловий спирт, суміш Нікіфорова;
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| І. Підготовчий етап 1. Надягніть гумові рукавички. 2. Підготуйте 2 предметних стекла (одне з них повинно бути вужчим і мати шліфований вузький кінець). 3. Поставте свій номер на ширшому склі. | |
| ІІ. виконання навички 1. Простерилізуйте пучку четвертого пальця лівої руки пацієнта 96% етиловим спиртом і зробіть прокол за допомогою одноразового скарифікатору, останній зараз же занурте у 0,5% розчин дезактину. Зітріть стерильною ватою першу краплю (занурте її у дезінфекційний розчин) і візьміть кров у стерильний капіляр Салі. 2. Нанесіть краплю крові пастерівською піпеткою на ширше скло ближче до правого кінця. Капіляр продезінфікуйте у 0,5% розчині дезактину протягом 60 хвилин. 3. Спеціально відшліфованим скельцем розподіліть краплю крові по ширині і швидко та обережно проведіть ним справа наліво під кутом 450. 4. Висушіть мазок на повітрі до повного висихання. 5. Зафіксуйте препарат хімічним методом (у розчині етилового спирту або суміші Нікіфорова протягом 10-15 хвилин). | |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук. | Забезпечується інфекційна безпека. |
алгоритм «Виготовлення препарату «товста крапля»:
Препарати використовують з тією ж метою, що і мазок крові.
Оснащення:
- набір для взяття крові;
- предметні скельця;
- 96% етиловий спирт, суміш Нікіфорова;
- пастерівська піпетка;
- дезінфекційний розчин;
- фіксатор;
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП 1. Надягніть гумові рукавички. 2. Візьміть знежирене предметне скельце. 3. Поставте свій номер зі зворотної сторони. |
| ЕТАПИ | ОБҐРУНТУВАННЯ |
| ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ 1. Простерилізуйте пучку четвертого пальця лівої руки пацієнта 96% етиловим спиртом і зробіть прокол за допомогою одноразового скарифікатору, останній зараз же занурте у 0,5% розчин дезактину. Зітріть стерильною ватою першу краплю (занурте її у дезінфекційний розчин) і візьміть кров у стерильний капіляр Салі. 2. Нанесіть 2-3 краплі крові пастерівською піпеткою на предметне скельце. Капіляр продезінфікуйте у 0,5% розчині дезактину протягом 60 хвилин. 3. За допомогою того ж капіляру розподіліть кров на поверхні скла так, щоб краплі були плоскими і рівномірними та негустими. Діаметр крапель повинен бути не більш ніж 15-20 мм. 4. Висушіть мазок на повітрі. 5. Зафіксуйте препарат хімічним методом (у розчині етилового спирту або суміші Нікіфорова протягом 10-15 хвилин). | |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук | Забезпечується інфекційна безпека. |
Алгоритм «Виготовлення препарату «зависла крапля»:
Препарат використовують для визначення рухливості бактерій.
Оснащення:
- мікроскоп;
- реактиви;
- лабораторний посуд;
- предметне скло з лункою;
- покривні скельця;
- бульйонна (12-18-годинна) культура досліджуваного мікроорганізму або інший
досліджуваний матеріал (рідкі випорожнення при холері);
- імерсійна олія;
- скляна паличка;
- пастерівська піпетка;
- бактеріологічна петля;
- спиртівка, сухий спирт, сірники;
- маркер;
- дезінфекційний розчин;
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП 1.Надягніть гумові рукавички. 2. Підготуйте реактиви, лабораторний посуд та необхідне оснащення. 3. Підпишіть зі зворотної сторони на предметному склі свій номер або номер культури. | |
| ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ 1. За допомогою скляної палички нанесіть тонкий шар вазеліну на краї лунки предметного скельця | Для закріплення покривного скельця. |
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| 2. У центр покривного скельця за допомогою стерильної пастерівської піпетки нанесіть невеличку краплю бульйонної культури. 3. Предметне скельце з лункою притуліть до покривного скла з культурою, щоб крапля знаходилась у центрі лунки. 4. Швидко переверніть препарат покривним скельцем догори. Крапля не повинна торкатись краю або дна лунки і повинна бути в центрі. 5.Проведіть мікроскопію при збільшенні спочатку х8, х40 або в імерсійній системі. 6. Визначте рухливість мікроорганізмів. 7. Після закінчення дослідження занурте препарат у дезінфекційний розчин. | Для попередження розтікання краплі. Для знезараження. |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1.Продезінфікуйте робоче місце. 2.Проведіть обробку рук, вимийте руки водою з милом. 3.Висушіть руки, змастіть їх кремом для рук. | Забезпечується інфекційна безпека. |
Алгоритм «Виготовлення препарату «роздавлена крапля»
Препарат використовують для діагностики, визначення рухливості мікроорганізмів, проростання спор у вегетативні форми, дії фізичних і хімічних факторів, імунних сироваток.
Оснащення:
- мікроскоп;
- реактиви;
- лабораторний посуд;
- бульйонна (12-18-годинна)культура досліджуваного мікроорганізму або інший
досліджуваний матеріал (рідкі випорожнення при холері);
- предметні і покривні скельця;
- 0,2% розчин дезактину;
- спиртівка, сухий спирт, сірники;
- маркер;
- імерсійна олія;
- вата, марля, ганчірка;
- бактеріологічна петля;
- пастерівська піпетка;
- пінцет, фільтрований папір;
- гумові рукавички, мило, рушник.
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП 1. Надягніть гумові рукавички. 2. Підготуйте знежирене предметне скельце, промаркіруйте. 3. Підберіть бульйонну культуру або досліджуваний матеріал для виготовлення препарату. | Для правильного виконання навички. |
| ЕТАПИ | обгрунтування |
| ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ 1. У центр предметного скельця за допомогою бактеріологічної петлі або стерильної пастерівської піпетки нанесіть невеличку краплю бульйонної культури. 2. Покривним склом накрийте краплю, не допускаючи утворення бульбашок повітря. Для цього покривне скельце ставлять на ребро біля краю краплі і обережно опускають на краплю культури, повільно витісняючи повітря між предметним и покривним скельцями. 3. Якщо культура виступає за краї покривного скельця, зайву її частину відсмоктують шматочком фільтрованого паперу, утримуючи його пінцетом. Після чого пінцет занурюють у дезінфекційний розчин. 4. Проведіть мікроскопію при збільшенні х40, а краще в імерсійній системі. 5.Після закінчення роботи занурте препарат у дезінфекційний розчин. | Для знезараження. |
| ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ 1.Продезінфікуйте робоче місце – візьміть пінцетом кульку з вати або марлі діаметром близько 2 см і, змочив її в дезінфікуючому розчині, протріть поверхню свого стола. Опустіть кульку в посуд з 0,2% розчином дезактину. Витріть стіл вологою ганчіркою. 2.Продезінфікуйте руки, вимийте руки водою з милом, висушіть. | Забезпечується інфекційна безпека. |
Завдання №2. Приготуйтемазки-препарати з патологічного матеріалу (зубного нальоту), проведіть забарвлення тушшю, проведіть мікроскопію у імерсійній системі, визначте форму мікроорганізмів, зарисуйте у щоденник.
Завдання №3. Приготуйте препарат «зависла крапля» і визначте рухливість запропонованої культури за допомогою імерсійної системи (за алгоритмом).
Завдання №4. Приготуйте препарат «роздавлена крапля» і визначте рухливість запропонованої культури за допомогою імерсійної системи (за алгоритмом).
Завдання №5. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.
Завдання №6 Оформіть щоденник. Зробіть висновки.
Література:
Ситник І.О., Климнюк С.І., Творко М.С. «Мікробіологія, вірусологія, імунологія», стор. 54-57.
В.А. Люта, О.В. Кононов «Практикум з мікробіології», стор. 27-30.
Дата добавления: 2015-04-11; просмотров: 278 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |