Читайте также:
|
(коли-титр и коли-индекс)
Обнаружение в пробах воды патогенных микроорганизмов обычно связано с большими трудностями и не всегда даёт достоверный результат. В связи с этим используют косвенные показатели возможного инфицирования воды – коли-титр и коли-индекс. Наличие кишечной палочки в воде указывает на фекальное загрязнение водоёма и на возможное присутствие в нём возбудителей заразных болезней.
При определении санитарно-показательных микроорганизмов рассчитывают коли-индекс и коли-титр.
Коли-индекс – количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП) в 1 л воды.
Коли-титр – наименьший объём в мл, в котором содержится одна клетка БГКП.
Согласно ГОСТ 2761-84 коли-титр питьевой воды должен быть ≥ 300, а коли-индекс ≤ 3.
К бактериям группы кишечных палочек относятся грамотрицательные неспорообразующие палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при 37°С в течение 24 – 48 часов или сбраживающих глюкозу с образованием кислоты и газа при той же температуре в течение 24 часов и не обладающих оксидазной активностью.
Титр кишечной палочкиопределяется методом двухфазной бродильной пробы (метод Булижа) или ускоренным методом мембранных фильтров. Сущность первого метода состоит в обнаружении роста кишечной палочки на жидкой среде Булижа. Этот метод достаточно трудоёмкий и занимает продолжительное время.
В настоящее время широкое распространение получил второй метод определения коли-титра и коли-индекса с помощью мембранных нитроцеллюлозных фильтров, имеющих определенный диаметр пор. Промышленность выпускает пять номеров фильтров. Чем меньше номер фильтра, тем меньше диаметр пор. Для анализа воды используют фильтры № 3, которые имеют поры диаметром 0,7 мкм. Через них в течение 2,5 минут фильтруют 500 мл воды.
Перед употреблением фильтры проверяют на целостность. Затем на матовой поверхности простым карандашом ставят номер исследуемого образца воды и кипятят в дистиллированной воде в течение 10 – 15 минут. Фильтр помещают блестящей поверхностью вниз на сетку специального фильтра Зейтца, вставленного в колбу Бунзена. В воронку наливают исследуемую воду и фильтруют при небольшом вакууме в колбе. После фильтрования стерильным пинцетом переносят мембранный фильтр на питательную среду в чашку Петри.
Фильтр кладут на питательный агар блестящей стороной вниз. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 24 часов. Через 24 часа производят подсчёт колоний, выросших на фильтрах. Кишечная палочка на агаре растет в виде тёмно-красных с металлическим блеском или розовых с тёмно-красным центром колоний.
Оборудование и реактивы: с терильные чашки Петри; чашка с агаром; пробирки с 9 мл стерильной воды; пробирки с расплавленным агаром по 15 мл; колбы с образцами речной и прудовой воды объёмом 100 мл; колба стерильная объёмом 500 мл для взятия пробы водопроводной воды; мембранные фильтры в стерилизаторе; пинцеты; фильтры Зейтца; микроскоп с осветителем; набор красителей; предметное стекло; микробиологическая петля; раствор этанола (96 % раствор).
Ход работы:
Готовят разведения из речной и прудовой воды до 1:1000.Отбирают пробу воды из водопровода (500 мл). Производят посев 1 мл разведённой и неразведённой водопроводной воды для определения общего числа микроорганизмов. Опредляют коли-титр водопроводной (300 мл), речной и прудовой воды (по 10 мл из разведения 1:100).
Нитроцеллюлозные пористые фильтры диаметром 35 мм (фильтр № 3) перед фильтрованием помещают в дистиллированную воду, имеющую температуру 50 – 60 °С и кипятят 2 – 3 раза по 10 – 15 минут с обязательной полной сменой воды. Подготовленный фильтр стерильным пинцетом помещают на сетку стерильного аппарата Зейтца. Стакан аппарата ввинчивают и пропускают воду через фильтр, что достигается созданием вакуума в фильтровальном сосуде. В зависимости от предполагаемого загрязнения фильтруют различное количество воды (от 1 до 500 мл). Затем фильтр снимают стерильным пинцетом и помещают в чашку Петри на среду с агаром. Чашки Петри с посевами помещают в термостат с температурой 37 °С на 24 часа. На следующий день подсчитывают количество выросших на фильтре колоний кишечной палочки.
Из колоний делают мазки, окрашивают их по Граму и проводят анализ. Для этого на предметное стекло наносят каплю культуры бактерий. Эту каплю растягивают в мазок с помощью микробиологической петли. Окрашивают мазок красителем кристаллический фиолетовый в течение 2 минут, затем наносят раствор Люголя (раствор I2 в KI) на 2 мин., при этом мазок чернеет. Обрабатывают мазок 96 % раствором этанола в течение 2 минут и тщательно промывают водой. Дополнительно окрашивают мазок фуксином, в результате на препарате грамположительные бактерии окрашены в синий цвет, а грамотрицательные – в розовый цвет.
Отсутствие в мазках грамотрицательных неспороносных палочек свидетельствует об отсутствии фекального загрязнения. В этом случае анализ заканчивается на первом этапе.
При наличии в мазках неспороносных грамотрицательных палочек переходят ко второму этапу анализа. Он заключается в посеве содержимого колоний, из которого готовились мазки, в пробирки на жидкую глюкозо-пептонную среду. Посевы помещают в термостат при температуре 37 °С на 24 часа. Образование газа в среде указывает на присутствие кишечной палочки.
Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 85 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |