Читайте также:
|
Иммунный статус определяется количеством и активностью лимфоидных и фагоцитарных клеток, находящихся в циркуляции, состоянием системы комплемента, факторов неспецифической резистентности, киллерными клетками, иммуноглобулинами, специфическими AT, ИЛ и другими показателями. Все параметры иммунного статуса можно разделить на: 1) неспецифические, отражающие общие изменения иммунной системы; 2) связанные с данной патологией опосредованно, и 3) специфические, устанавливающие конкретные иммунные механизмы заболеваний. Неспецифические показатели. Наиболее широко распространённые методы оценки иммунного статуса связаны с лимфоцитами. Для их выделения разработаны различные методические приёмы.
Создаются градиенты плотности сред, задерживающие именно эти клетки за счет их плотности: фиколл-верографин, фиколл-гипак, плазма-перколл и др. В ряде случаев от эритроцитов освобождаются с помощью различных лизирующих растворов и т.д. Оценка состояния трёх основных звеньев иммунитета — Т-, В- и фагоцитарного, разделяется на количественную и функциональную. Количественное тестирование популяций и субпопуляций лимфоцитов основано на характеристике специфических для каждого вида клеток рецепторов, по их способности связываться с Аг либо с клетками. Так, Т-лимфоциты, например, несут рецепторы к эритроцитам барана и образуют с ними так называемые Е-РОК. Подсчитав процент таких клеток и переведя его в абсолютные значения, можно определить содержание Т-лимфоцитов. В-клетки образуют розетки либо с эритроцитами мышей, либо с эритроцитами быка, нагруженными AT против них и комплементом — ЕАС-РОК.
Более чувствительной является идентификация клеток с помощью моноклональных AT против маркерных Аг популяций и субпопуляций лимфоцитов. Исследуемые лимфоциты обрабатывают монокло-нальными AT (анти-CD), далее либо диагностикумами, нагруженными AT против «первых» AT, либо AT и их Fab-фрагментами (против «первых» AT), мечеными флуорохромами, дающими специфическое свечение в люминесцентном микроскопе. Созданы лазерные сортеры (проточные цитофлуориметры) для выявления субпопуляций лимфоцитов, меченых таким образом моноклональными AT.
Для оценки функциональной активности клеточного звена иммунитета используют 4 группы методов.
1. Постановка кожных проб ГЗТ.
2. Стимуляция лимфоцитов in vitro в РБТЛ
3. Функциональная оценка Т-хелперов.
4. Функциональная оценка Т-супрессоров (киллерных клеток и т. д.).Для постановки кожных проб используется: очищенный туберкулин (реакция Пирке), паротитный, стрептококковый, столбнячный, дифтерийный Аг, трихофитии, кандидин, стрептокиназа, динитрох-лорбензол и др.
Стимуляция лимфоцитов в РБТЛ основана на способности лимфоцитов при определённых условиях превращаться в увеличенные бластоподобные клетки, активно синтезирующие ДНК. Для характеристики функции Т-хелперов мононуклеарные клетки крови инкубируются с поликлональным активатором лимфоцитов митогеном лаконоса и количественно измеряют индуцированную им продукцию иммуноглобулинов. Далее в систему добавляют клетки с предполагаемой хелперной способностью и определяют прирост образования иммуноглобулинов. Для оценки функции Т-супрессоров воспроизводится описанная выше методика, но в культуру добавляют клетки с супрессорной активностью, регистрируя снижение суммарных иммуноглобулинов.
Одним из методов оценки функциональной активности В-лимфо-цитов является оценка синтеза иммуноглобулинов в культуре этих клеток, а также определение в сыворотке крови, слюне, кишечном содержимом количества иммунных глобулинов основных классов. Для этого используется метод двумерной диффузии в агаровом геле, разработанный Манчини (в лунки агарового геля, содержащего AT к различным классам иммуноглобулинов, добавляют искомые сыворотки, содержащие Ig, образуются кольца преципитации, размер которых по номограммам позволяет определить концентрацию Ig разных классов). Дополнительным показателем в оценке гуморального иммунитета является определение концентрации естественных AT, например, изогемагглютининов (титр в норме 1:16—1:64), уровень AT к кишечной палочке, Аг коклюшного возбудителя, дифтерии, столбняка, поскольку подавляющее большинство людей иммунизировано данными Аг в плановом порядке, т.е. AT против указанных Аг должны быть у всех.
Для измерения функции системы фагоцитоза изучается микробоцидная способность, фагоцитарная активность, подвижность моноцитов и гранулярных лейкоцитов (гранулоцитов). Метаболическая способность определяется косвенным путем в тесте восстановления нитросинего тетразолия, используя спонтанную и индуцированную реакции. Кислородный метаболизм фагоцитов также изучают методом хе-милюминесценции, который обусловлен генерацией Н202 и супероксидного радикала и прямо коррелирует с киллерной способностью клетки. Применяющиеся методы позволяют определить непосредственно кислородный метаболизм, образование различных активных кислородных радикалов индивидуальными клетками. Последний анализ может выполняться на проточном цитофлуориметре.
Поглотительные возможности определяют в реакции фагоцитоза указанных клеток каких-либо объектов: бактерий, дрожжевых клеток, частиц латекса, зимозана и т.д. Подсчитывается процент фагоцитирующих лейкоцитов и фагоцитарный индекс, отражающий среднее число поглощённых одним фагоцитом частиц при подсчете 100 клеток. Для оценки функциональных резервов фагоцитирующих клеток использовали фагоцитарную реакцию с определением фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа. Для определения переваривающей способности клеток реакцию учитывали через 30 мин и через 2 ч. В качестве стимулятора in vitro использовали продигиозан. Киллерная способность фагоцитов может быть определена непосредственно по киллингу живых дрожжей, который оценивается с помощью красителя акридинового оранжевого, применяются и специальные красители, позволяющие определить киллинг бактерий отдельными фагоцитами на проточном цитофлуориметре.
Подвижность фагоцитов, в частности нейтрофильных гранулоцитов или моноцитов периферической крови, измеряется либо по величине спонтанной миграции из капилляров за определённый промежуток времени, либо по измерению этой реакции в присутствии веществ, обладающих хемотаксическим действием. Анализируется также адгезия на поверхность или их агрегация, четко отражающие функциональную активность клеток, в том числе обусловливаемую молекулами адгезии. Определение рецепторов на нейтрофилах или моноцитах также проводится для оценки функциональной активности фагоцитарной системы. Оценка системы комплемента производится в гемолитической системе, состоящей из эритроцитов барана со специфической антисывороткой к ним. Сыворотку предварительно прогревают при 56° С в течение 30 мин для разрушения собственного комплемента, а затем добавляют её в исследуемую сыворотку как источник AT. Рассчитывается 50% гемолиз, содержание комплемента выражают в единицах С'Н50 (единица активности комплемента, за которую принимают количество комплемента, вызывающее 50% лизис определённого количества сенсибилизированных специфическими AT эритроцитов).
Количественное определение компонентов комплемента и ингибиторов проводится иммунохимическим методом с использованием моноспецифических анти-сывороток по методу Манчини или в системе, где отсутствует какой-либо определённый компонент системы комплемента, а остальные ее компоненты присутствуют в избытке. Активность киллерных клеток измеряется в пробах с мишенями, мечеными радиоактивными изотопами, которые выделяются в культурную среду после разрушения клеток киллером.
К специфическим методам оценки иммунного статуса относят иммунофлуоресценцию — использование AT, меченых иммунофлуоресцирующим красителем, например флуоресцеи-ном изотиоцианатом, родамином и др. С их помощью обнаруживают места локализации Аг. В ультрафиолетовом свете они хорошо видны. При радиоиммунном методе используют меченые радионуклидами I131 или I125 (радиоизотопы йода) AT или Аг. Применяют стандартное количество антисыворотки, связывающей 70—80% меченого Аг. Затем в реагирующую систему вносят искомый немеченый Аг. Он конкурирует с меченым за AT. Суммарная радиоактивность реагирующей системы падает. Чем больше немеченого Аг в системе, тем в большей степени снижается её радиоактивность, которую можно измерить, и по полученным данным определить содержание искомого (немеченого) Аг в исследуемой смеси.Метод иммуноферментного анализа (ИФА) чувствителен и достаточно прост. Реакцию обычно ставят в пластиковых планшетах, к полистиролу лунок фиксируют AT к Аг, который следует обнаружить в материале; в другой модификации можно использовать маркерный Аг. Далее вносится исследуемый субстрат, содержащий искомый Аг. Он соединяется с AT, образуя комплекс Аг-АТ. Не прореагировавший исследуемый субстрат удаляют и вместо него вносят AT, меченые каким-либо ферментом, например, пероксидазой хрена. Они присоединяются к комплексу Аг-АТ, адсорбированному на полистироле лунки. Далее в систему вносят вещество, дающее цветную реакцию в присутствии пероксидазы хрена. По интенсивности окрашивания количественно оценивается реакция.
1. 33Иммунодефициты. Классификация
Иммунодефицит - это нарушение структуры и функции какого-либо звена целостной иммунной системы, потеря организмом способности сопротивляться любым инфекциям и восстанавливать нарушения своих органов. Кроме того, при иммунодефиците замедляется или вообще останавливается процесс обновления организма.
При иммунодефиците человек становится беззащитным не только перед обычными инфекциями, как грипп или дизентерия, но также перед бактериями и вирусами, которые ранее не могли вызвать заболевания, так как иммунная система не позволяла им размножаться в большом количестве. Один из примеров - пневмоциста - бактерия, живущая в легких практически каждого человека. При здоровой иммунной системе она не причиняет человеку никакого вреда, но при иммунодефиците может вызвать серьезное поражение легких - пневмоцистную пневмонию.
Кроме того, иммунодефицит приводит к обострению тех хронических заболеваний, которые были у человека, но не имели ярко выраженных симптомов и, может быть, никогда бы не привели к серьезным проблемам со здоровьем.
Иммунодефицит - врожденный или приобретенный дефект иммунной системы, проявляющийся резким снижением количества отдельных популяций иммунокомпетентных клеток или нарушением синтеза иммуноглобулинов (агаммаглобулинемия).Повреждение или недостаточность функции одного или нескольких звеньев в иммунной системе приводит к нарушению иммунного ответа, к той форме иммунопатологии, которая получила название иммунодефицитных состояний.
Все иммунодефицитные состояния делятся на две большие группы:
- врожденный (наследственно обусловленный) иммунодефицит и
- приобретенный иммунодефицит.
В основе наследственно обусловленного иммунодефицитного состояния (первичной иммунологической недостаточности) лежат генетически детерминированные дефекты клеток иммунной системы.
В то же время приобретенный иммунодефицит (вторичная иммунологическая недостаточность) является результатом воздействия факторов внешней среды на клетки иммунной системы. К наиболее полно изученным факторам приобретенного иммунодефицита относятся облучение, фармакологические средства и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) человека, вызванный вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Врожденный (наследственно обусловленный) иммунодефицит (первичная иммунологическая недостаточность) определяется как специфической иммунной недостаточностью, так и неспецифической иммунной недостаточностью.
Причинами заболеваний, обусловленных специфической иммунной недостаточностью, служат нарушения функций T-лимфоцитов или B-лимфоцитов - основы приобретенного иммунитета. Неспецифические иммунодефициты связаны с нарушениями в таких элементах иммунной системы, как комплемент и фагоциты, действующих при иммунном ответе неспецифично. Нарушения в работе иммунной системы могут быть связаны и с комплексными нарушениями, затрагивающими многие звенья иммунитета. При иммунодефицитном состоянии наблюдается повышенная чувствительность к инфекциям. Наиболее часто возникающие у таких больных инфекции можно разделить на две категории Иммунодефицит врожденный
Клинические проявления первичных иммунодефицитов.
Характерные:
- Рецидивирующие инфекции верхних дыхательных путей
- Тяжелые бактериальные инфекции
- Хронические инфекции, плохо поддающиеся лечению
Частые:
- Задержка развития
- Инфекции, вызванные редкими микроорганизмами
- Поражение кожи: сыпь, себорейный дерматит, пиодермия, абсцессы, алопеция, зудящие дерматиты, телеангиэктазии
- Стойкий кандидоз рта
- Рецидивирующий бронхит, пневмония
- Аутоиммунные заболевания
- Уменьшение лимфоузлов и миндалин
- Гематологические нарушения: апластическая или гемолитическая анемия, нейтропения, тромбоцитопения
Редкие:
- Похудание, лихорадка
- Хронический конъюнктивит
- Увеличение лимфоузлов
- Гепатоспленомегалия
- Тяжелые вирусные инфекции, например вызванные вирусами простого герпеса или varicella-zoster
- Артралгия, артрит
- Хронический энцефалит
- Рецидивирующий менингит
- Гангренозная пиодермия
- Осложнения вакцинации
- Бронхоэктазы
- Позднее отпадение пуповины
- Хронический стоматит, пародонтит
Существует множество иммунодефицитов, обусловленых разными причинами. В настоящее время идентифицировано более 70 врожденных (первичных) иммуннодефицитов. Обычно это тяжелые заболевания у детей, вызываемые дефектами какого-либо звена иммунной системы. Дефекты могут затрагивать разные иммунокомпетентные клетки, в том числе Т- и В-лимфоциты и макрофаги. Примером преимущественного поражения Т-клеточного звена иммунитета может служить синдром Ди Джорджи, который сопровождается недоразвитием тимуса. Дефекты Т-клеток повышают чувствительность организма к разнообразным микроорганизмам (от дрожжей до вирусов), которые в норме безвредны.
Нарушения в макрофагах также приводят к тяжелым патологиям, например, к хроническому гранулематозу. Известны патологии, связанные с выработкой антител В-лимфоцитами. При этом возрастает восприимчивость организма к повторным инфекциям, вызываемым гноеродными бактериями.
Врожденные иммунодефициты встречаются довольно редко (в среднем 1 случай на 25000-100000 человек).
Дата добавления: 2015-02-22; просмотров: 113 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |