Читайте также:
|
При данной пористости (концентрации) геля описаннаявыше
линейная зависимость имеет место только для белков, молеку-
лярные массы которых лежат в определенном интервале. Слиш-
ком крупные для данного геля белки, очевидно, вовсе не смогут
мигрировать в нем. Подвижности слишком малых белков, для
которых поры геля практически не создают препятствий, будут
зависеть не от их молекулярной массы, а только от отношения
заряда к массе. Как указывалось, в присутствии ДДС-Na это
отношение одинаково для большинства белков. Для ориентиров-
ки можно назвать некоторые цифры. Так, для одинаково сши-
тых гелей (С = 3,3) были рекомендованы следующие значения Т
в зависимости от молекулярной массы белков (M) [Dunker,
Rueckert, 1969]:
Фирма BDH для своего стандартного набора белков-марке-
ров в интервале М 56 — 280 тыс. дальтон предлагает использо-
вать гели с T = 3,3, а в интервале 14 — 72 тыс. — с T = 10; в обоих
случаях С = 2,6. Отметим попутно, что эффект торможения миг-
рации биополимеров в слабосшитых гелях с С < 2,6 быстро ос-
лабляется с уменьшением С при неизменном значении Т. По-
видимому, в этом случае ярко проявляется способность жестко-
го комплекса белок — ДДС-Na раздвигать гибкие, слабосшитые
нити акриламида.
Для определения молекулярных масс пептидов та же фирма
выпускает набор стандартных фрагментов миоглобина с диапа-
зоном М 2,5 — 17 тыс. Для него и соответствующих пептидов ре-
комендуется использовать сильно сшитый гель (Т = 12,5; С =
= 9), содержащий 8 М мочевину, которая усиливает торможение
малых пептидов в геле.
О важности правильного выбора пористости геля можно су-
дить из сопоставления двух картин разделения набора из семи
маркерных белков (рис. 19) [Fehrnström, Moberg, 1977]:
Разделение вели в приборе «Мультифор», использовав 5%- и
10%-ный ПААГ. Легко видеть, что в 5%-ном геле миоглобин
движется почти с такой же скоростью, как и цитохром с. При
перенесении результатов этих опытов на графики (рис. 20) по-
лучается, как и следовало ожидать, что точка, отвечающая по-
ложению цитохрома с в 5%-ном геле, выпадает из прямой ли-
нии, проходящей через все остальные точки, тогда как для 10%-
ного геля она оказывается на такой прямой.
Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 76 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |