Читайте также:
|
Для серологической диагностики необходимо иметь сыворотки двух проб крови (парные сыворотки), взятых в начале и в конце болезни. Первую пробу берут как можно раньше - в инкубационный период или в начале проявления клинических симптомов болезни, вторую - во время выздоровления или через 2-3 нед после заболевания. Брать кровь и готовить сыворотку необходимо стерильно, нельзя применять антикоагулянты или консерванты, которые могут сделать сыворотку антикомплементарной, а в реакции нейтрализации оказать инактивирующее действие на вирус или оказаться токсичными для культур клеток либо просто нестерильными. Кровь в объеме 10-15 мл берут в стерильные пробирки с резиновыми пробками, выдерживают при комнатной температуре до образования сгустка, обводят стеклянной палочкой (или другим инструментом) и переносят в холодильник при 4°С на 18-20 ч. После максимальной ретракции сгустка сыворотку отсасывают, добавляют антибиотики - пенициллин и стрептомицин по 100 ЕД./мл, проводят высевы на бактериологические среды. Вместо отстаивания в холодильнике можно после обведения кровь центрифугировать.
Серологические методы вирусологической диагностики требуют исследования парных сывороток, поэтому необходимо правильно сохранять первые пробы, пока не будут получены вторые. Хранить сыворотки необходимо в холодильнике при 4°С или в замороженном состоянии, строго соблюдая порядок нумерации и соответствия записей в журнале и пробах.
Известно, что вирус находится в клетке, поэтому в процессе приготовления рабочей суспензии из патматериала необходимо разрушить как можно больше клеток, чтобы извлечь из них максимальное количество вируса.
Для вирусологических исследований готовится 10% рабочая суспензия на физиологическом растворе. С этой целью в лаборатории из доставленного патологического материала отбирается в стерильную ступку 0,5-1,0 граммов из каждого кусочка паренхиматозных органов, мелко измельчается ткань стерильными ножницами, добавляется 0,2-0,5 грамма сухого стерильного речного песка или мелко измельченного стекла и стерильным пестиком тщательно растираются ткани.
При этом острые грани песка или стекла разрушают клетки, освобождая с цитоплазмой вирус.
Затем в ступку на каждый грамм растертой ткани приливается 9 мл стерильного физиологического раствора, получается 10% рабочая суспензия.
Содержимое ступки хорошо перемешивается и отстаивается 3-5 минут для оседания обрывков тканей, частиц песка или стекла.
Надосадочную жидкость осторожно сливают в чистые стерильные пробирки и при помощи воронки через обычный бумажный фильтр проводят фильтрацию рабочей суспензии в аналогичную посуду для освобождения суспензии от грубых взвешенных частиц.
Пробирки с приготовленной суспензией подписываются, ставятся в штативы и помещаются в холодильник при температуре +40 С до следующего занятия.
Дата добавления: 2014-12-20; просмотров: 234 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |