Читайте также:
|
За 15 минут перед началом определения в стеклянную камеру, где будет проходить хроматографирование, наливают раствор промывной жидкости (растворитель) на высоту 1 – 2 см (но не выше предполагаемой границы старта), это необходимо для насыщения рабочей камеры парами растворителя. После этого начинают подготовку определяемых растворов.
Наиболее важным является концентрация наносимых веществ. В ТСХ принято наносить концентрации растворов около 1%. Взвешивают 1 г кристаллической фруктозы и 1 г сахарозы, помещают навески в две разные мерные колбы объемом 100 мл и заливают дистиллированной водой до метки. Из мерных колб берут анализируемый раствор и наносят на «линию старта» 1 – 2 см от нижнего края пластины. Это необходимо для того, чтобы при опускании пластинки в систему не происходило растворение в ней образцов, а все нанесенное вещество подверглось хроматографированию.
Нанесение растворов проводят либо микрошприцом, либо отградуированными капиллярами в количестве 1мкл. Размер наносимого пятна не должен превышать 4 мм.
Нанесение на пластины исследуемых веществ не должны сопровождаться разрушением сорбента (что довольно сильно влияет на качество разделения), поэтому капля должна наноситься касанием иглы или капилляра о слой сорбента, а не надавливанием. Расстояние между наносимыми пятнами должно быть около 2 см.
Удаление растворителей обычно проводят естественной сушкой пластин 5 – 10 мин, либо при нагревании в сушильном шкафу. После высыхания пластин их помещают в хроматографическую камеру. В качестве хроматографической камеры можно использовать любую емкость с плоским дном и плотно закрывающейся крышкой, в которую свободно помещается хроматографическая пластинка.
Фронт растворителя движется под действием капиллярных сил по пластинке сквозь селикагель, увлекая за собой исследуемые вещества. При движении по порам фруктоза и сахароза притягивается к селикагелю, вынуждающими вещества перемещаться с разными скоростями. Необходимо следить за фронтом растворителя, при подъеме на высоту 14 – 15 см, но не выше 1 см от верхнего края, пластинку вынимают из камеры.
После процесса разделения исследуемых веществ, пластинки сушат. В состав системы входят высококипящие жидкости (бутиловый спирт, вода, уксусная кислота), сушку пластин нужно проводить не менее 10 мин или помещать пластинку в сушильный шкаф.
Высушенная пластинка является хроматограммой исследуемых веществ. Если вещества являются окрашенными, то идентификация начинается с определения цвета разделенных веществ. Но в большинстве случаев разделяемые вещества бесцветны и простое визуальное сравнение невозможно. Для этого на пластинку наносят анилинфосфатный проявитель и сушат при температуре 110°С. После проявки определяют расстояние от линии старта до центров пятен разделенных веществ и рассчитывают Rf показатель для каждого пятна и определяют наличие веществ в исследуемом растворе.
Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 83 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |