Читайте также:
|
Цель работы: количественное определение аминокислот с помощью аминокислотного анализатора.
Зная количественный и качественный состав продуктов питания можно судить об их пищевой ценности. Аминокислоты – это производные жирных кислот с общей формулой
| R – CH – COOH |
| NH2 |
В различных органических природных соединениях они встречаются в свободном виде, формируют специфическую структуру молекул белков и пептидов.
Аминокислоты являются амфотерными электролитами, в водных растворах существуют в виде диполярных ионов
– R – COOO–
Способность аминокислот находиться в растворе в ионизированном состоянии и их кислотно-основные свойства имеют важное значение для идентификации и количественного анализа аминокислот, пептидов и белков.
Оборудование и реактивы: аминокислотный анализатор; сушильный шкаф или термостат; центрифуга; вакуум-эксикатор или роторный испаритель; холодильник; мерные колбы; фильтры; стеклянная посуда с притертыми пробками; бромистый водород; лимонная кислота; соляная кислота; парафин; гранулированный гидроксид натрия; дистиллированная вода; цитратный буфер; муравьиная кислота; перекись водорода.
Ход работы:
В пробе определяют общий белок, содержание липидов и влажность. Для жидких продуктов учитывают содержащуюся воду в процессе приготовления гидролизующей смеси таким образом, чтобы концентрация соляной кислоты была 6 моль/дм3.
При содержании липидов более 5% (по массе) проводят обезжиривание способом, указанном в таблице 15. После обезжиривания остаток подсушивают на воздухе и определяют содержание общего белка.
Таблица 15. Способы удаления липидов
| Объекты | Способ удаления липидов | Массовое соотношение белок:соляная кислота, моль/дм3 |
| Белковые концентраты (изоляты) | Не требуется | 1:200 |
| Мясо, рыба, мясные и рыбные консервы, субпродукты | Экстракция 10-кратным количеством диэтилового эфира 3 – 4 раза или смесью этанол- хлороформ (1:2) 10-кратным количеством 2 раза | 1:250 |
| Молоко и молочные продукты | Экстракция 10-кратным к навеске количеством смесью этанол-хлороформ (1:2) 2 раза | 1:1000 |
| Зерно и зернопродукты | Не требуется | 1:1000 |
| Растительные продукты | Не требуется | 1:500 |
| Мясорастительные и рыборастительные продукты | Экстракция 10-кратным количеством диэтилового эфира 3 – 4 раза; смесью этанол-хлороформ (1:2) 10-кратным количеством к навеске 2 раза | 1:500 |
| Яйцо, яичные продукты | Экстракция смесью этанол-хлороформ (1:2), 10-кратным количеством к навеске 2 раза | 1:200 |
Величину навески образца для гидролиза рассчитывают, исходя из соотношений белка к кислоте, представленных в таблице 15, и при условии содержания белка в пробе не менее 5 мг.
Навеску продукта или обезжиренного ocтатка, подготовленного к гидролизу, взятую с точностью 0,0002 г, помещают в стеклянную ампулу с оттянутым концом, заливают расчетным количеством соляной кислоты (в случае жидких продуктов берут расчетное количество концентрированной кислоты и доводят до концентрации 6 моль/дм3.
Ампулу запаивают, устанавливают в строго вертикальном положении в металлический патрон или фарфоровый стакан с парафином, и помещаю в сушильный шкаф с заранее отрегулированной температурой (110±2) °С. Нагревание проводят непрерывно в течение 24 ч. Затем ампулу охлаждают до комнатной температуры.
Ампулу вскрывают и сразу приступают к удалению соляной кислоты. Если в гидролизате образовался видимый осадок, его удаляют центрифугированием или фильтрованием с последующим доведением фильтрата в мерной колбе на 25 см3 до точного объема. В случае конечного объема больше 5 см3 и при использовании высокочувствительных приборов для удаления соляной кислоты берут аликвоту.
Удаление соляной кислоты проводят одним из следующих способов:
а) помещают ампулу или пробирку в вакуум-эксикатор над гранулированным гидратом окиси натрия (NaOH) на 12 – 18 ч;
б) на роторном испарителе при температуре не выше 60 °С. Для этого гидролизат количественно переносят в грушевидную колбу, ополаскивая ампулу дистиллированной водой.
Остаток переносят количественно в мерную колбу с помощью цитратного буфера рН 2,2 или раствора соляной кислоты 0,02 моль/дм3 и доводят до метки. Полученный раствор гидролизата подвергают анализу на аминокислотном анализаторе, при необходимости разводят или фильтруют.
В случае если анализ не может быть проведен немедленно, осадок освобождают от следов соляной кислоты путем добавления к нему дистиллированной воды и повторного испарения на роторном испарителе или в вакуумном эксикаторе. Операцию повторяют до полного исчезновения запаха соляной кислоты.
Хранят образец в морозильной камере или нижней камере холодильники при температуре не выше +5°С, перед анализом разводят цитратным буфером до необходимой концентрации. Обнаруженный осадок отфильтровывают через плотный фильтр.
Дата добавления: 2015-09-11; просмотров: 89 | Поможем написать вашу работу | Нарушение авторских прав |